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自动化核酸质控常青树——安捷伦2100生物分析仪

 优宁维 2022-06-08 发布于上海

核酸质控在我们做生物实验时是一项可能会被忽视,但是其实很重要的工作。因为我们的核酸质量会直接影响到我们之后的实验成败,如果没有对核酸进行质量控制,我们甚至可能会在下游实验中得到错误的实验结果。
 
而我们传统的核酸质控往往采用凝胶电泳的方法。步骤繁琐,耗时耗力,实验效率较低。也容易产生人为误差,影响质控分析结果。而且对于多次结果之间也无法直接比较,更多的依靠我们对于条带的主观判断。

那么我们有没有灵敏度更高,实验效率更好,实验步骤更简单的核酸质控方式呢?

答案是 当然有!

2100生物分析仪于1999年上市,是安捷伦自动化电泳产品中的常青树,也是目前在安捷伦样本质控产品中唯一一台可以检测DNA,RNA和蛋白质的仪器。仪器配套DNA,RNA和蛋白质的多款检测试剂盒,可以检测不同灵敏级别和不同分子量的核酸和蛋白,操作非常便宜。与传统凝胶电泳方法相比,可以减少人工实验步骤,只需三步就可以实现样本质控。

1、RNA检测金标准

该生物分析仪拥有专利数字化评价RNA质量体系:RIN值。可以清晰精准的对RNA质量进行评估,是业内公认的RNA检测金标准。RIN值数字为1到10。 数字越大表示核酸质量越好。 如果我们下游需要做测序的话,我们核酸RIN值必须要大于7,不然我们就会面临测序失败风险。
 

2、2100生物分析仪工作原理
2100生物分析采用微控流芯片技术,运行和分析软件同一个,简单易操作,可以提供准确的结果,检测核酸浓度,纯度,和完整性。检测会通过独创的芯片来实行,在芯片背后就有着微流孔道。

操作原理
1. 样品自样品孔处沿微通道移动
2. 样品被注入分离微通道
3. 样品组分通过电泳被分离
4. 各组分通过其荧光被检测,并被转换成胶样图像(条带)和电泳色谱图(峰)

3、试剂和软件介绍
不同的样本类型有相对应的试剂盒可以选择。试剂盒中就包含仪器配套的芯片和所有试剂。试剂中包含染料,Gel,Marker和标准品。在第一次使用试剂盒的时候需要把染料和Gel混合,并且涡旋混匀,形成Mix。Mix避光储存在4℃中,这样后续可以继续使用。在正式实验前,所有的试剂必须提前取出,恢复至室温,才能进行下一步操作。


在上机之前需要进行芯片制备。在购买2100生物分析仪的时候会配置芯片工作台。首先需要将芯片放置在芯片工作台上通过针管注入染料胶Mix,整个过程需要等待一分钟,直到Mix注满芯片下方的微孔道。然后我们只需要按照说明书指导开始加样即可。

等芯片制备完毕之后,我们就可以上机检测啦。在电脑上操作也非常简单,新人友好,很容易上手,属于有手就会的简单程度。
第一步:确认芯片是否正确放入仪器
当你的芯片准备就绪的时候,你的软件上就会出现芯片的图案。如果你的软件上出现了其他图案,他们也有各自所代表的含义,需要我们进一步调整。

 
像下图这样,就表示你已经可以开始进行下一步操作啦。
 


第二步:选择检测类型
我们可以选取右边的ASSAYS 按键,选择我们检测的类型:DNA,RNA 或者蛋白质检测。
 
第三步:设置样本信息和选择文件储存位置
我们对样本进行标注或者添加别的信息,设置好储存位置,实验结束后就可以在电脑指定的文件夹里找到我们的Row data。 

第四部:开始分析
等上述内容都设施妥当之后,我们只需要用鼠标按一下绿色的START按钮,就可以开始我们的检测了。

 
4、结果分析

以单细胞RNA样本为例,我们可以选择胶图或者是电泳峰图进行结果的展示。软件也会显示出样本RNA的RIN值。从图中可以样本在18s和28s有两个明显的峰值,没有过多杂峰,胶图也很清新,没有明显拖带。RIN值等于9.4。 由此可见,这个样本的RNA完整度非常不错。

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