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师姐，上次你给我讲的RNA提取小诀窍太有用了，之后提取RNA一直很顺利，走咱俩看电影去呗~
不用谢，应该的嘛~，看电影没问题。师姐实验很顺利，有的是时间~
师姐你怎么这么神？说到实验我又遇到了新问题
，RNA检测报告我看不明白，求教师姐~
没问题，不过电影是不是还得再看一次啊
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好啊，没问题~
继上次小编帮助学弟解答RNA提取相关问题后，（感兴趣的小伙伴可戳RNA提取又不合格？那你一定需要了解这些~），又要为小师弟解答RNA检测相关的问题~你若是也存在同样的疑惑，请认真听小编的讲解~ 检测方法 1）1％的琼脂糖电泳检测RNA样品是否有降解以及杂质。 2）NanoPhotometer® 分光光度计检测样品纯度。 3）Qubit® 3.0 Flurometer检测RNA样品浓度。 4）安捷伦2100 RNA Nano 6000 Assay Kit检测RNA样品的完整性。 涉及指标 RNA样本总量及完整性是评判样品质量的关键点，其中RNA完整性评估依靠RIN值、28S/18S（或者23S/16S）以及Agilent 2100 检测峰图基线是否平整来综合评判。对于降解样本难以获取完整的转录本信息，影响数据质量及完整性。当RNA总量较低时，会导致建库成功率低，或数据dup率高等问题。下面小编就来详细介绍每个指标代表的意义。
RNA电泳胶图 RNA 电泳胶图主要需查看以下几方面： 1）看目的条带是否明亮清晰 2）看泳道内是否有降解弥散区 3）看胶孔处有无蛋白污染 4）看有无DNA污染 5）看有无外源物种核酸污染 目的条带明亮清晰，泳道无弥散区，无蛋白和DNA污染的样品质量较好。 动物样品胶图上可见目的条带为28S、18S、5S，植物样品为25S、18S、5S，昆虫或者软体动物18S、5S，原核样品23S、16S、5S。下面是两组不同质量的RNA电泳图示例。
RNA质量较好的示例
外源污染和降解示例 RIN值 RNA Integrity Number（RIN）数值大小即反应样品完整性情况，数值越接近10表明样品完整性越高，反之RIN值越小完整性越差。特殊样品需结合2100峰图一起评估。Agilent 2100 Bioanalyzer检测不仅可以得到样品RIN，还可以得到样品的浓度和28S/18S（原核生物为23S/16S）。
Agilent 2100 Bioanalyzer 28S/18S 28S和18S比值（28S/18S）是评估样品完整性的另一项指标，真核生物的比值大于等于1.5 表示RNA完整性较好，如比值逆转，则表明RNA降解。 原核生物23S/16S数值大于等于1.2 表明RNA完整性较好。 节肢动物的RNA在2100检测前热变性的过程会使28S拆成两个片段，所以节肢动物无28S/18S判定指标。 2100峰图 如下是两个RNA样品2100检测结果示例。
真核生物样品完整性较好2100检测峰图
真核生物样品完整性较差2100检测峰图 可知2100检测会提供2100峰图、样品浓度、28S/18S、RIN值、峰面积、模拟胶图等信息。峰图中需重点查看基线是否平整，有无降解杂峰，28S与18S峰形及比值。 OD260/OD280 OD260/OD230 OD260/OD230与OD260/OD280均用于判断RNA纯度，分别表示RNA样品中有无碳水化合物和蛋白质污染。 A230nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，如酚，糖类等；A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长，如 RNA，DNA，引物等；A280nm 是蛋白质最高吸收峰的吸收波长。 纯RNA：1.7 ＜OD260/280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）。纯 RNA的OD260/230比值为2.5，若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类），盐类或有机溶剂污染。
NanoDrop 2000微量分光光度计 了解以上信息，看懂RNA检测报告就是小case了~ 各位小伙伴是不是也希望有我这么一个贴心且博学的学姐啊~那就请关注我们的微信号，多多后台留言吧~小编会密切关注、热情解答留言中的每一个问题，并且还不会要求请我看电影哦~ 安诺基因拥有专业的RNA提取检测团队，一流的质检平台，保证样品检测结果准确可靠。RNA样品质检合格后，欢迎随时与我们联系~ 安诺基因在RNA-seq方面具有丰富的项目经验，拥有高水平实验团队，先进的测序平台，经验丰富的分析团队，产品类型包括circRNA测序，全转录组测序，lncRNA测序，普通转录组测序等，个性化分析+高级分析任您选，全方位助力您的科研之路。 文案：RNA产品经理 范如婷 |
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