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1.本发明属于农药杀菌剂领域，特别是关于防治烟草棒孢霉叶斑病的药剂筛选及其应用。 背景技术： ：：2.烟草是我国重要的经济作物，烟草叶斑病是引起烟叶减产的重要病害之一，多主棒孢霉(c.cassiicola)是引起烟草叶斑病的病原菌之一。3.咯菌腈，又称氟咯菌腈、适乐时等。英文通用名称是fludioxonil，分子式是c12h6f2n2o2相对分子质量248.18，cas号13141-86-1，是一种适用于小麦、大麦、玉米、棉花、大豆、花生、水稻、油菜、马铃薯、蔬菜等多种作物的病害防治的化学农药。其作用机制是通过抑制葡萄糖磷酰化有关的转移，并抑制真菌菌丝体的生长，最终导致病菌死亡。作用机理独特，与现有杀菌剂无交互抗性。国际上杀菌剂抗性行动小组frac认为咯菌腈的作用机理是影响渗透压调节信号相关的组氨酸激酶的活性。4.咪鲜胺，英文通用名称是prochloraz，分子式是c15h16cl3n3o2，相对分子质量376.7，是一种可用于防治多种植物病害的广谱性杀菌剂。对多种作物由子囊菌和半知菌引起的病害具有明显的防效，也可以与大多数杀菌剂、杀虫剂、除草剂混用，均有较好的防治效果。对大田作物、水果蔬菜、草皮及观赏植物上的多种病害具有治疗和铲除作用，属于咪唑类杀菌剂。5.申请人前期调研发现，现有技术中公开了包含咯菌腈和咪鲜胺的杀菌组合物，但是并没有公开组合物用于烟草棒孢霉叶斑病的相关报道；并且农药信息网查询，也没有组合物用于烟草棒孢霉叶斑病的相关产品登记。例如专利文献cn101642126a公开了一种杀菌组合物，有效成分为咯菌腈(a)和其他活性成分咪鲜胺、嘧霉胺、腐霉利、异菌脲、菌核净和乙霉威中的任一种(b)，有效成分a与b的质量比例为50∶1～1∶50；用于灰霉病的防治。例如专利文献cn102763666a公开了一种含有咪鲜胺的杀菌剂，一种含有咪鲜胺的杀菌剂，其特征在于：它包括由杀菌剂a和杀菌剂b复配而成的原药，其中，杀菌剂a与杀菌剂b的配比为：1-80∶1-80；所述杀菌剂a为咪鲜胺；所述杀菌剂b为下述杀菌剂中任选其一：醚菌酯、嘧菌酯、氟嘧菌酯、氟硅唑、氟菌唑、咯菌腈。6.申请人通过药剂筛选，选择出针对烟草棒孢霉叶斑病具有优异杀菌活性并且具有增效作用的杀菌剂组合物。技术实现要素：7.本发明提供一种防治烟草棒孢霉叶斑病的杀菌组合物及其应用；组合物具有显著的增效作用，可有效降低活性成分的使用剂量，减缓病菌抗药性的产生。具体方法如下：8.一种杀菌组合物用于防治烟草棒孢霉叶斑病的用途，其特征在于：所述烟草叶斑病的病原菌为多主棒孢霉(corynesporacassiicola)；所述的杀菌组合物中活性成分由咯菌腈和咪鲜胺组成，并且所述的咯菌腈和咪鲜胺质量比为1∶6-1∶10、1∶15；或者所述杀菌组合物中活性成分由氟环唑和咪鲜胺组成，并且所述氟环唑和咪鲜胺质量比为1∶1、1∶10、2∶1。9.优选的所述的杀菌组合物中活性成分由咯菌腈和咪鲜胺组成，并且所述的咯菌腈和咪鲜胺质量比为1∶6-1∶10。特别优选的所述的咯菌腈和咪鲜胺质量比1∶10。10.杀菌组合物中包含农药上辅料，制备成农药制剂的形式。所述农药制剂中活性成分的百分含量为5-75％。所述农药制剂为水分散粒剂、可湿性粉剂、悬浮剂、油悬浮剂。11.本发明有益技术效果：12.本发明筛选出了针对烟草棒孢霉叶斑病的特效药剂，并且筛选出了具有增效作用的药剂组合物及其配比。本发明杀菌组合物具有显著的增效作用，可有效降低活性成分的使用剂量，减缓病菌抗药性的产生。附图说明13.图1：12种杀菌剂对棒孢霉菌丝生长抑制图14.图2：咯菌腈和咪鲜胺复配剂对棒孢霉菌丝生长抑制图15.图3：咯菌腈和氟环唑复配对棒孢霉菌丝生长抑制图16.图4：氟环唑和咪鲜胺复配对棒孢霉菌丝生长抑制图17.图5：咯菌腈和咪鲜胺复配剂对棒孢霉菌丝生长抑制图具体实施方式18.下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。19.供试材料如下：20.(1)供试菌种21.供试烟草叶斑病的病原菌(多主棒孢霉c.cassiicola)由安徽农业大学植物保护学院菌种库提供。22.(2)供试药剂23.原药：咪鲜胺、腈菌唑、氟环唑、戊唑醇、吡唑醚菌酯、多菌灵、菌核净、氯溴异氰尿酸、咯菌腈、甲基硫丙唑、苯丙甲环唑、甲基硫菌灵；24.试剂：丙酮(分析纯)、36％盐酸；25.实施例126.杀菌剂筛选27.采用菌丝生长速率法测定供试杀菌剂对棒孢霉的室内毒力，具体方法如下：28.(1)称取0.05g杀菌剂原药至50ml离心管中，用10ml移液枪吸取5ml丙酮(不同原药的溶剂不相同，大多数原药的溶剂是丙酮，溶解多菌灵使用的溶剂是盐酸)加入离心管中使原药充分溶解后，加无菌水稀释至50ml，此溶液a即为1000mg/l母液；29.(2)向培养基中加入药剂前将母液摇匀，根据设置平板浓度从母液中吸取一定量的母液加至60ml的pda培养基，混匀后平均倒入3个直径90mm培养皿中，待平板冷却凝固；30.(3)选取菌落直径为培养皿2/3左右的菌落，并在菌落边缘打取6mm菌饼，接至直径为90mm的培养皿中央，封口，倒置平板放入25℃的黑暗恒温培养箱中；31.(4)待ck菌落直径长至培养皿的2/3左右时，十字交叉法测量各浓度下的菌落直径；32.(5)通过相关软件求得抑菌率及对应的几率值、浓度对数、毒力回归方程、相关系数、ec50值。33.如图1和表1所示，12种杀菌剂对烟草棒孢霉的ec50值由小到大分别为，咯菌腈(0.1089mg/l)、咪鲜胺(0.1415mg/l)、氟环唑(0.1883mg/l)、吡唑醚菌酯(0.6490mg/l)、戊唑醇(0.6992mg/l)、甲基硫丙唑(0.8456mg/l)、多菌灵(1.6106mg/l)、苯丙甲环唑(1.8468mg/l)、甲基硫菌灵(2.4216mg/l)、腈菌唑(3.6234mg/l)、菌核净(3.9533mg/l)、氯溴异氰尿酸(29.7076mg/l)。在12种杀菌剂中，对棒孢霉菌落生长抑制效果最好的是咯菌腈，其次是咪鲜胺、氟环唑。34.表112种杀菌剂室内毒力测定35.table1indoortoxicitydeterminationof12kindsoffungicides[0036][0037][0038]根据对12种杀菌剂的室内毒力测定结果可知，咯菌腈、咪鲜胺、氟环唑三种杀菌剂对棒孢霉的菌落生长抑制效果较好，因此选择这三种杀菌剂两两复配，进行复配剂筛选。[0039]实施例2[0040]复配剂筛选[0041]采用孙云沛的方法测定不同配比的复配剂对棒孢霉的联合毒力：[0042]配制浓度为1000mg/l的母液b和c，吸取10ml母液b和1ml母液c混合后即得b∶c质量比为10∶1的母液，同理得到8∶1、6∶1、4∶1、2∶1、1∶2、1∶4、1∶6、1∶8、1∶10个比例溶液，溶液浓度均为1000mg/l。[0043]实验重复3次。[0044]理论的ec50值和增效系数sr，计算方法如下：[0045][0046]注：a：配比中原药a的含量；b：配比中原药b的含量；a1：原药a的ec50；b1：原药b的ec50。[0047][0048]注：sr＞1.5即增效作用；[0049]0.5≤sr≤1.5即加和作用；[0050]sr＜0.5即拮抗作用。[0051]复配剂筛选的具体实验结果总结如下：[0052](1)咯菌腈和咪鲜胺复配剂的毒力测定结果[0053]如图2和表2所示，咯菌腈和咪鲜胺的11个复配比例中，有3个复配比例具有增效作用，增效系数由小到大的顺序为1∶8＜1∶6＜1∶10，其中复配比例1∶10的增效系数最大为4.5933。有7个复配比例是加和作用，增效系数由小到大的顺序为2∶1＜6∶1＜8∶1＜1∶4＜1∶2＜1∶1＜4∶1，所对应的增效系数依次为0.5162、0.6533、0.7116、0.7690、0.8234、1.0923、1.3357。所有复配比例中增效系数最小的复配比例是10∶1，增效系数为0.4812。[0054]咯菌腈和咪鲜胺复配的实测ec50中，各个复配比例的实测ec50值从小到大为1∶10＜1∶6＜1∶8＜4∶1＜1∶1＜1∶2＜8∶1＜6∶1＜1∶4＜2∶1＜10∶1，复配比例1∶10的实测ec50值最小，为0.0300mg/l，复配比例10∶1的实测ec50值最大，为0.2311mg/l。总体来看，咯菌腈占比多的比例中，复配剂的ec50偏大，咪鲜胺占比多的比例中，ec50相对偏小，从这方面说明了添加咪鲜胺对咯菌腈具有增效作用。[0055]表2咯菌腈和咪鲜胺复配对烟草棒孢霉的联合毒力测定[0056]table2combinedtoxicityofpyronitrileandprochlorazagainstcorynesporatabacum[0057][0058](2)咯菌腈和氟环唑复配剂的毒力测定结果[0059]如图3和表3所示，咯菌腈和氟环唑的11个复配比例中，有10个复配比例的增效系数小于0.5，属于拮抗作用。只有10∶1比例为加和作用，增效系数为0.5871。11个复配比例的增效系数由小到大的顺序为1∶2＜2∶1＜1∶1＜6∶1＜1∶4＜4∶1＜8∶1＜1∶6＜1∶10＜1∶8＜10∶1，所对应的增效系数依次为0.1723、0.1983、0.2040、0.2101、0.3520、0.3719、0.4308、0.4470、0.4562、0.4713、0.5871。[0060]咯菌腈和氟环唑复配的实测ec50中，各个复配比例的实测ec50值从小到大为10∶1＜8∶1＜4∶1＜1∶8＜1∶6＜1∶10＜1∶4＜6∶1＜1∶1＜2∶1＜1∶2，复配比例10：1的实测ec50值最小，为0.1928mg/l，复配比例1∶2的实测ec50值最大，为0.8783mg/l。总体来看，咯菌腈与氟环唑的复配比例中没有具有增效作用的比例。[0061]表3咯菌腈和氟环唑复配对烟草棒孢霉的联合毒力测定[0062]table3combinedtoxicityofpyronitrileandfluconazoleagainstcorynesporatabacum[0063][0064](3)氟环唑和咪鲜胺复配剂的毒力测定结果[0065]如图4和表4所示，氟环唑和咪鲜胺的11个复配比例中，有3个复配比例具有增效作用，增效系数由小到大的顺序为1∶1＜1∶10＜2∶1，其中复配比例2∶1的增效系数最大为2.0835。有8个复配比例是加和作用，增效系数由小到大的顺序为8∶1＜4∶1＜1∶4＜10∶1＜1∶6＜1∶8＜1∶2＜6∶1，所对应的增效系数依次为0.5718、0.8394、0.8592、0.8926、0.1063、0.1098、0.1989、1.3348。所有复配比例中增效系数最小的复配比例是8∶1，增效系数为0.5718。[0066]氟环唑和咪鲜胺复配的实测ec50中，各个复配比例的实测ec50值从小到大为2∶1＜1∶10＜1∶1＜1∶2＜1∶8＜1∶6＜6∶1＜1∶4＜10∶1＜4∶1＜8∶1，复配比例2∶1的实测ec50值最小，为0.0814mg/l，复配比例8∶1的实测ec50值最大，为0.3176mg/l。[0067]表4氟环唑和咪鲜胺复配对烟草棒孢霉的联合毒力测定[0068]table4combinedtoxicityofprochlorazandfluconazoleagainstcorynesporatabacum[0069][0070][0071](4)咯菌腈和咪鲜胺复配剂的毒力测定结果[0072]通过以上内容可知，复配效果最好的比例为咯菌腈∶咪鲜胺＝1∶10，为了进一步验证，又进行了咯菌腈与咪鲜胺1∶11至1∶15这五个比例的室内毒力测定实验。如图5和表5所示，实验结果表明增设的这五个比例中只有咯菌腈∶咪鲜胺＝1∶15时具有增效作用，增效系数为1.8016，实测ec50值为0.0771mg/l。其他四个比例均不具有增效作用。[0073]综上所述，在所有的复配剂筛选中，最终确定复配效果最好的比例为咯菌腈∶咪鲜胺＝1∶10。将以此作为依据继续油悬浮剂的制备实验。[0074]表5咯菌腈和咪鲜胺复配对烟草棒孢霉的联合毒力测定[0075]table5combinedtoxicityofpyronitrileandprochlorazagainstcorynesporatabacum[0076][0077]以上内容是结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，不能认定本发明具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属 技术领域： ：的普通技术人员来说，在不脱离本发明的构思的前提下，还可以做出若干简单的推演或替换，都应当视为属于本发明所提交的权利要求书确定的保护范围。当前第1页12当前第1页12 |
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