错配修复蛋白IHC结果判读介绍

MMR4个主要蛋白中任意一个或多个表达缺陷时，判读为错配修复蛋白表达缺陷（dMMR），若4个蛋白均表达正常，则判读为错配修复表达正常（pMMR）

随着药物临床实验的进展，适用于免疫治疗的癌症范围正在不断增加，错配修复的检测也变得越来越普遍。MMR功能缺失可以通过免疫组化来进行评估，本文介绍一些错配修复蛋白免疫组化中的异常表达模式及结果解释中常遇到的一些挑战。

错配修复蛋白免疫组化常见表达模式

一

正常MMR蛋白表达

图1，结直肠癌：MLH-1、MSH-2、MSH-6和PMS-2均有核表达(仅显示MLH-1)。肿瘤细胞及间质(图1A)、非肿瘤性大肠上皮(图1B)和淋巴结节的生发中心(图1C)，后两种为阳性对照组织。

MMR蛋白在肿瘤细胞内的表达通常比在许多内部阳性对照细胞中更强烈——尽管染色强度在不同实验室甚至不同染色之间也可能存在较大差异。

二

异常MMR蛋白表达

图2，结肠直肠癌：图2A是HE染色，图2B和图2C分别是MLH1及PMS2免疫组化染色。腺癌细胞MLH1和PMS2的核表达缺失，MSH2和MSH6正常核表达。

结果解释：该表达谱与MLH-1失活或该基因内存在突变相一致。

MLH-1和PMS-2核表达缺失是结直肠癌和子宫内膜癌中最常见的MMR异常表达模式。这种情况可能是由于MLH-1失活(更常见)或突变(不常见)造成的。需要转诊进行临床遗传学评估。

三

MMR蛋白表达区域缺失

图3，转移性乳腺癌：MLH-1和PMS-2核表达的区域缺失（图3B和3C）。内部阳性对照表达，MSH-2和MSH-6核表达（未显示）。

结果解释：这种模式与MLH-1和PMS-2的克隆缺失相一致，可能是由于MLH-1中存在一个体细胞突变。因此，不需要转诊进行临床遗传学评估。

四

MMR蛋白的完全和区

域性缺失

图4，结直肠癌：MSH-6核表达的区域缺失(图4D到4F)，整个肿瘤中MLH-1(图4B)和PMS-2(图4G)核表达缺失，内部阳性对照正常表达，腺癌细胞中MSH-2正常核表达。

结果解释：在MSH-6免疫组化染色中，腺癌细胞表达和不表达MSH-6区域中内部阳性对照染色都表达，所以MSH-6异质性表达可能发生在肿瘤腺体之间或单个腺体内。MSH-6缺失的模式很可能是肿瘤细胞MSH-6突变的结果。

图5，结直肠癌：MSH-6核表达缺失（图5C）以及MSH-2异质核表达（图5B）。

在MSH-2染色中，腺癌细胞区域性不表达，内部阳性对照染色排除了染色过程中干片导致的不均匀这一可能性。MLH-1和PMS-2在腺癌细胞中保持核表达（未显示）。

结果解释：尽管这个染色模式不同寻常，但这种模式表明MSH-2或MSH-6存在突变。因此，建议进行临床遗传学评估。

图6，结直肠癌：存在细胞质MSH-2的表达（图6B和6C），没有显示核MSH-2或MSH-6(图6D)的表达。内部阳性对照表达，证实了MSH-2和MSH-6染色在技术上无缺陷。MLH-1和PMS-2在腺癌细胞中保持核表达（未显示）。

结果解释：这是一种异常的MSH-2表达模式，具有与核MSH-2表达相同的意义。因此，建议推荐进行临床遗传学评估。

图7，无柄锯齿状病变(SSL)：MLH-1点状核表达（图7B），同时PMS-2核缺失（图7C），内部阳性对照表达。MSH-2和MSH-6核表达（未显示）。

结果解释：这是一种异常的表达模式，具有与MLH-1核表达完全缺失相同的意义。这种点状模式并不是特定于SSL组织，也可以在其他组织例如CRC中看到，参见图11。

五

 MMR蛋白在结直肠腺

瘤和腺癌中的表达

图8，结肠直肠腺瘤-腺癌：在腺癌细胞（图8D）和邻近的腺瘤细胞中显示PMS-2核表达缺失（图8B和8C）。不过，后一种细胞中PMS-2表达缺失表现为不均匀的阳性表达，内部阳性对照正常表达。MLH-1、MSH-2和MSH-6的正常核表达（未显示）。

结果解释：这种表达模式高度提示PMS-2中存在突变。约80%结直肠腺瘤病例存在林奇综合征，MMR蛋白IHC染色结果正好印证了这一比例的病例有MMR蛋白缺失表达。因此，当考虑到林奇综合征时，结直肠腺瘤中MMR蛋白表达缺失是一个很有用的工具。不过要注意的是，即使存在林奇综合征，在腺瘤中也可能四种MMR蛋白的均保留表达。因此，建议转诊进行临床遗传学评估。

六

皮脂腺肿瘤中MMR

蛋白的表达

图9，皮脂腺瘤：MLH-1核表达缺失（图9B），PMS-2核表达也缺失，但MSH-2和MSH-6均核表达（未显示）。

结果解释：这些病变MMR蛋白表达缺失可能与Lynch综合征有关。MMR蛋白在皮脂腺肿瘤中不表达很常见（15-60%），MMR蛋白IHC对林奇综合征的敏感性很高（81-85%）。在大多数这些病变中，dMMR与潜在的MMR基因突变无关，因此MMR蛋白IHC识别林奇综合征的特异性相对较低（48%）。

七

MMR蛋白在其他癌症中

的表达

图10，少突胶质细胞瘤：MSH-2（图10B）和MSH-6（图10C）核表达缺失。内部阳性对照表达（在内皮细胞内-图10B和10C；在非肿瘤神经元中-图10D），MLH-1和PMS-2核表达（未显示）。

结果解释：这种表达模式高度提示MSH-2中存在突变。该病例患者5年前因结肠腺癌行结肠切除术，已知患有林奇综合征。在这种情况下，少突胶质细胞瘤中MSH-2和MSH-6表达缺失与林奇综合征引起的肿瘤相一致。如果没有已知的林奇综合征病史和临床遗传学的研究要求，对该肿瘤可能不会进行MMR蛋白IHC以确定它是否可能是由dMMR引起的。虽然林奇综合征最常与结直肠癌和子宫内膜癌相关，但越来越多的其他肿瘤与林奇综合征相关。

八

结直肠锯齿状病变中

MMR蛋白的表达

图11，SSL：在这些SSL中，MLH-1核表达缺失（图11B至11D）。内部阳性对照表达。

结果解释：通常这与BRAF突变有关，由于MLH-1启动子序列的高甲基化-结直肠癌锯齿状通路的特征基因改变，PMS-2表达也缺失。在SSLs中，MLH-1(和PMS-2)的核表达(病例1-图11B和11C)和“最小偏差”发育不良(病例2-图11D)的核表达缺失，通常不发生在“腺瘤状”或“锯齿状”的发育不良模式。因此，这些MMR蛋白在IHC上的表达缺失可以支持SSLs中常规发育不良的诊断，但如果没有MMR蛋白表达缺失，则不排除发育不良增生，需要基于形态学的判别。

九

MMR蛋白免疫组化染色

的技术问题

图12，子宫内膜腺癌：任何解剖部位和/或肿瘤类型的组织固定不良往往导致技术欠佳的MMR蛋白IHC，苏木精和伊红染色提示这种情况的发生（病例1-图12A；病例2-图12F）。在这种情况下，IHC染色强度在相邻区域/恶性腺体之间存在显著差异（图12B），或者在单个恶性腺体内可能出现异质性（病例1-图12C和12D；以及病例2-图12G）。有时几乎没有明显的IHC染色，但弱染色可能为灰色或浅棕色细胞核(病例1-图12D)。在这种情况下，一个有用的线索是没有（几乎或完全）内部阳性对照染色。

单个组织块中肿瘤和非肿瘤组织区域之间的固定质量差异也可能导致肿瘤内dMMR的虚假染色，因为良性组织中MMR蛋白免疫组化染色通常较强(图12E)。然而，高倍镜检查经常会发现肿瘤内MMR蛋白免疫组化染色较弱和/或不均匀。

结果解释：MMR蛋白IHC在这两种情况中都没有显示出dMMR的证据。请注意，术语“染色”已经在上面的段落中使用了，而不是“表达式”。这是因为在这些例子中，IHC染色（技术上）是次优的，而不是MMR蛋白表达的性质。MMR蛋白IHC的技术问题很常见，特别是当存在次优的组织固定时。建议与相应的苏木精和伊红染色切片进行比较，以确保组织块中存在充分固定和处理良好的肿瘤。在这些情况下，仔细检查IHC切片的内部阳性对照染色的存在和强度是非常必要的。外部阳性对照可以确认与IHC相关的过程已经以令人满意的方式发生。然而，并不排除在病例材料中存在抗原保存问题的可能性。

结论

在筛查林奇综合征时，识别dMMR非常重要，同时在帮助预测肿瘤是否可能对新的免疫疗法有反应时，这也越来越重要。虽然有几种检测dMMR的方法，但MMR蛋白免疫组化被广泛应用。在这种情况下，IHC解释的原则对所有肿瘤类型都是共同的。不仅需要评估MMR在肿瘤细胞中的表达，而且在内部阳性对照细胞和组织中观察染色结果以确保结果准确性也尤为重要。

参考文献

Bateman A C. DNA mismatch repair protein immunohistochemistry – An illustrated guide[J]. Histopathology.