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去乙酰化酶是存在于所有动物细胞核中的酶蛋白,能提高DNA的稳定性、修复及防卫功能等,具有抑制身体老化的作用。组蛋白去乙酰化酶是目前世面上应用最多的一种药物,它通常会用来治疗肿瘤。随着临床研究进展，组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂作为一种新型抗肿瘤药物，已在复发或难治性PTCL 治疗中取得了显著成果。组蛋白去乙酰化酶抑制剂的作用主要是用来抑制各种炎性因子和促纤维化因子。抑制新陈代谢降低、提高细胞活性因子， 基因的正常表达与调控是机体正常生长发育所必需的。组蛋白乙酰转移酶(histoneacetyltransferases, HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDAC)可以通过调节组蛋白或转录因子的乙酰化状态来调节基因的活化或沉默。HAT引发染色质结构的松散,激活转录;而HDAC则可导致染色质集缩,并抑制特定靶基因的转录。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)能抑制HDAC的活性,并通过改变组蛋白或转录因子的乙酰化状态诱导肿瘤细胞生长停滞、分化或凋亡,具有明显的抗肿瘤活性。 p21~(WAF1/CIP1)基因编码的蛋白是一种细胞周期依赖性蛋白激酶因子(CDKI),在细胞周期调控,细胞凋亡和细胞分化中都起着重要的作用。研究表明,p21~(WAF1/CIP1)基因作为一种重要的抑癌基因,其表达量的多少与肿瘤密切相关。p21~(WAF1/CIP1)基因的低表达,可造成异常细胞增生,有益于肿瘤的形成。在乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等多种癌症中,p21~(WAF1/CIP1)基因的表达明显降低。最近的研究表明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA、NaB、PB、SAHA、FK-228、MS-275和Oxamflatin等可以诱导p21~(WAF1/CIP1)基因表达的增加,而且这种诱导主要发生在转录调节水平上,因此,利用p21~(WAF1/CIP1)基因启动子构建的报告基因系统作为药物筛选的模型,完全有可能筛选到新的组蛋白去乙酰化酶抑制剂,并最终用于相关癌症的治疗。 建立一种简便易行、高度敏感和高效率的筛选组蛋白去乙酰化酶抑制剂的方法和技术平台,并用于从现有中药组分库中筛选组蛋白去乙酰化酶抑制剂。将以组蛋白去乙酰化酶为靶标的筛选模型用于从现有中药化学组分库中筛选抑制剂的研究是本论文的创新点。 我们通过构建含有p21~(WAF1/CIP1)基因启动子的报告基因质粒,经转染293细胞后,筛选得到含有p21~(WAF1/CIP1)基因启动子报告基因的稳定转染细胞系,然后以该细胞系为组蛋白去乙酰化酶抑制剂筛选模型,从现有的中药有效成份化学组分库中,进行组蛋白去乙酰化酶抑制剂的筛选,此项工作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂的筛选奠定了基础。
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