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细胞系种类繁多，培养条件和培养方式各不相同。有的细胞系容易培养，怎么操作都可以长满且形态正常，而有的细胞系如果不按正确方法处理，再怎么精心呵护，都不能达到满意的细胞状态。「博士德」细胞室根据多年的细胞培养经验，与大家分享以下三种常用且不易培养的细胞培养攻略。 BOSTER NO.1 RAW 264.7 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)  RAW 264.7 细胞是用于炎症模型最常用的细胞之一，但培养 RAW 264.7 细胞普遍会遇到的一个问题：它太容易分化了，养着养着分化的细胞越来越多。 1. RAW264.7 细胞形态  ▲RAW 264.7 正常细胞形态 （圆形或梭形，圆形居多）  ▲RAW 264.7 较好细胞形态 （大多圆形，极少梭形）   ▲RAW 264.7 分化细胞形态 （呈多角形，体积明显增大，时常有较长的黑色触角） 2.RAW 264.7 细胞正确传代方法 RAW 264.7 细胞所用培养基为含 10% FBS 的 DMEM（高糖）培养基，正确的传代方法是 RAW 264.7 细胞培养的关键，每一步操作都要细致入微，稍有不慎细胞就分化了。RAW 264.7 细胞不能用胰酶消化，胰酶消化传代反而更容易分化。博士德生物培养 RAW 264.7 细胞二十余年，摸索出一个吹打传代的方法，此方法操作简单，能更好地控制细胞分化率。 吹打传代步骤（T25 细胞瓶）→ Step 1： 将培养瓶里的培养液用移液管吸干净； Step 2： 用 3 mL PBS 将细胞层清洗一遍； Step 3： 用移液管或巴氏吸管吸取 5 mL 新鲜的 DMEM（高糖）培养基轻轻将细胞吹打下来，并在培养瓶里将细胞吹打成单细胞悬液； Step 4： 视密度情况将吹打好的单细胞悬液分装接种到几个新的培养瓶中，并补上完全培养基。 3.RAW 264.7 细胞注意事项 ①RAW 264.7 细胞要及时传代，根据经验三天不传代更易分化，而且更难吹下，所以接种密度要把控好，建议高比例传代，1:2～1:3 传代； ②吹打时力度一定要轻，切勿暴力吹打，只需接种比较容易吹打下来的圆形细胞，不需要强制性全部吹下来，梭形细胞或分化细胞贴壁较牢可直接舍弃； ③吹打力度过大会导致传代后细胞出现部分漂浮情况，可将漂浮细胞收集离心，然后吹散重新接种到新的培养瓶； ④RAW 264.7 培养时，无法保证 100% 不分化，通过及时吹打传代可将分化比例控制在一定范围。 4.博士德 RAW 264.7 细胞相关产品
扫码查看产品详情 BOSTER NO.2 SH-SY5Y （人神经母细胞瘤细胞）  SH-SY5Y 细胞是所有细胞培养中闻之胆怯的细胞，出了名的「容易漂浮，容易聚团」，并且无论你怎么处理都改善不了反而聚团越来越严重或者漂浮细胞越来越多。 1.SH-SY5Y 细胞简介 ① SH-SY5Y 细胞于 1970 年构建，是骨瘤转移灶的神经母细胞瘤 SK-N-SH 细胞系经 3 次克隆后得到的亚系（SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y）。 ②SH-SY5Y 细胞是一个半贴壁半悬浮细胞，贴壁细胞居多，少量漂浮生长。贴壁细胞呈上皮样，有短触角延伸出来，倾向于成簇生长，容易成团。所用培养基为含 15% FBS 的 DMEM/F12 完全培养基。  ▲SH-SY5Y 正常生长细胞形态 2.SH-SY5Y 细胞收货常见问题及解决办法 问 收货时发现细胞皱缩怎么办？ 答 SH-SY5Y 细胞由于运输过程中导致收货后有细胞皱缩没有形态，可以将细胞放进细胞培养箱静置复温约 4 小时，4 小时后查看细胞形态是否展开，若仍未伸展开，可吸掉瓶里培养基留 5～10 mL 培养基在瓶中过夜复温，若展开了即可正常消化传代。 问 收货时发现细胞脱落怎么办？ 答 SH-SY5Y 细胞因为贴壁不牢很容易因为运输而导致部分细胞脱落，先把细胞放进培养箱静置约 4 小时稳定状态，贴壁的细胞用常规胰酶消化方法处理进行接种（贴壁细胞少可以留部分培养基放回培养箱培养，贴壁细胞多可以进行传代）。 脱落细胞按以下步骤处理→ Step 1： 将脱落的细胞用离心管收集起来 1000 转离心 3 分钟； Step 2： 丢弃离心管培养基，用 PBS 将细胞沉淀重悬，再次 1000 转 3 分钟离心； Step 3： 丢弃离心管 PBS，用 1 mL 0.25% 胰蛋白酶重悬细胞沉淀（轻轻混匀即可），然后放入培养箱消化 1 分钟左右； Step 4： 加入 4 mL DMEM/F12 完全培养基终止消化，并轻轻吹打细胞，使细胞分散成单细胞悬液； Step 5： 将细胞悬液 1000 转 3 分钟离心； Step 6： 用 DMEM/F12 完全培养基将细胞重悬并接种到新的细胞培养瓶中。 3.SH-SY5Y 细胞如何传代和避免聚团？ ① SH-SY5Y 细胞因为饱和密度大所以在密度 80% 时就要及时传代，传代为常规的 0.25% 胰蛋白酶消化，消化时间一定要把控好，1 分钟左右细胞就会脱落要及时终止消化，细胞长满推荐传代比例 1:3～1:6，低密度传代可减少细胞成团几率。 ②若细胞传代后出现细胞成团生长，可静养几天，待细胞生长稳定，细胞团边缘出现展开的细胞时，重新消化铺瓶，此时可在接种时额外补充 5～10% 的胎牛血清来加快细胞的贴壁速度，从而减少细胞聚集成团几率。 4.SH-SY5Y 细胞经处理后仍聚团严重怎么办？  ▲SH-SY5Y 细胞成团现象得不到改善 解决办法如下→ Step 1： 吸掉培养瓶中旧的培养基，用PBS润洗一遍，去掉 PBS； Step 2： 加2-3ml胰酶，转动瓶子，让所有细胞都润到，然后竖立培养瓶吸掉多余的胰酶，用少量残留胰酶消化； Step 3： 放培养箱直接消化 10 分钟，期间不要拿出来看，到时间后，加 10ml 完全培养基把细胞吹下来，吹打时注意不要起泡沫，多吹一会儿，慢慢吹成单细胞悬液； Step 4： 1000 转离心 3 分钟，去上清，新鲜完培重悬细胞到新的细胞培养瓶中。  ▲SH-SY5Y 细胞成团经过以上方法处理后 5.博士德 SH-SY5Y 细胞相关产品
扫码查看产品详情 BOSTER NO.3 THP-1 (人单核细胞白血病)  THP-1 细胞是悬浮细胞中相对不太好培养的细胞，给大家的印象就是细胞比较脆弱，容易死亡，复苏成活率低，有聚团生长现象。 1.THP-1 细胞简介 ① THP-1 细胞从一名1岁患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达 C3R 和 FcR，可受佛波酯 TPA 诱导向单核系方向分化。 ②THP-1 细胞是一个悬浮生长细胞，培养条件为含10%FBS和0.05mM β-巯基乙醇的RPMI-1640完全培养基。β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响，不加β-巯基乙醇可能会导致细胞生长缓慢。另外THP-1对血清要求较高，建议用质量好一点的优级胎牛血清。 ▲THP-1 细胞正常形态 2.THP-1 细胞收货注意事项 ① 受到运输影响，悬浮细胞会短暂性出现形态改变的现象，如伪足和细胞回缩，不够圆润。建议将细胞放培养箱复温至少4小时以上，待细胞状态恢复后再传代。 ②复温好后若瓶中培养基颜色正常，细胞密度 60% 以下建议直接将细胞瓶摇晃均匀，然后视密度情况分装到几个新的细胞瓶中。 ③复温后若发现培养基颜色偏黄，表明培养基营养不足，显微镜下观察细胞密度较大，可将细胞瓶竖立 5 分钟左右，待细胞都靠重力沉降作用沉到瓶底后，将上层培养基吸掉，留 10-20ml 培养基，将细胞瓶摇晃均匀，然后将细胞悬液分装到新瓶并补充新鲜完全培养基。 3.THP-1 细胞换液问题 ① 补液法。细胞瓶中培养基变黄可直接补加新鲜培养基，补加一两次后可通过离心（800 转 3 分钟）将旧液丢弃换成新鲜培养基。 ②半换液法。以 T25 细胞瓶为例，一般放 10ml 培养基培养 THP-1 细胞，当发现培养基颜色变黄时，将细胞瓶竖着放置5分钟，待细胞沉降到瓶底后吸到上层 5ml 培养基，同时补充 5ml 新鲜培养基即可。 4.THP-1 细胞传代问题 由于 THP-1 细胞比较脆弱，尽量避免离心传代。若细胞状态正常，建议采用摇匀直接分装的方法传代，将细胞瓶摇匀视密度情况分装到几个新瓶中，然后每个瓶补充新鲜完培。 5.THP-1 有死细胞碎片背景不干净怎么办？ 方法一：低速离心法 将细胞收集到离心管 800 转低速离心，再将细胞沉淀用培养基重悬至新的细胞瓶，并补上新鲜培养基，待隔一两天发现细胞碎片减少后再进行一次低速离心去掉细胞碎片。 方法二：低密度传代法→ 以 T25 细胞瓶 10ml 培养基为例，发现死细胞碎片较多时，可将细胞瓶摇晃均匀，然后吸取 2ml 细胞悬液到新的培养瓶，补上 8ml 新鲜完培进行培养。待密度长到 80% 后，细胞碎片会相应减少一些，然后再吸取 2ml 细胞悬液到新的培养瓶，补上 8ml 新鲜完培进行培养，这样每进行一次低密度传代碎片都会减少，重复几次碎片基本就会消失，背景也就干净了。 6.THP-1 细胞有聚团现象怎么办？ THP-1 细胞培养时会有少量细胞聚团，呈葡萄串状，属正常现象，特别是细胞密度较低时易出现这种情况，更换质量好一点的血清或增大血清比例（不超过 20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，它会自己分散开。 7.THP-1 细胞复苏成活率低怎么办？ THP-1 细胞复苏时比其它细胞复苏成活率低，主要因为 THP-1 细胞极其脆弱，加上冻存过程造成细胞损伤，所以正确的复苏步骤是提高复苏成活率的关键。 提高复苏成活率的操作步骤→ Step 1： 提前准备 37℃ 水浴锅，将含有 10%FBS 和 0.05mM β-巯基乙醇的 RPMI-1640 完全培养基预热； Step 2： 将细胞冻存管从液氮罐取出后迅速在 37℃ 水浴锅内快速摇晃，尽量在1分钟内融化； Step 3： 取一支离心管装入 10ml 预热的完全培养基，将冻存管细胞加到里面； Step 4： 将离心管细胞 800 转离心 3 分钟； Step 5： 弃上清，用 1ml 完全培养基重悬细胞沉淀到细胞培养瓶中，并补上预热好的新鲜完全培养基，同时额外补加胎牛血清使血清浓度达到 15%-20%，待后期细胞稳定后可将血清浓度降到 10%。 8. 博士德 THP-1 细胞相关产品
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