一、实验目的 通过本实验,掌握从土壤和植物中分离植物线虫的基本原理,学会从土壤和植物中分离线虫的常用方法----漏斗分离法,并掌握线虫的计数方法。 二、实验原理 将带有线虫的植物组织或土壤浸在水中,短时间内在水中检查不到线虫,但经过较长的时间,线虫由于趋水性,就会离开植物组织或土壤在水中游动,又由于自身的重量即比重大于水,最后都逐渐沉降到容器的底部,从而将植物线虫分离出来。 三、实验器皿与试材 1主要器皿:漏斗(直径为10-15cm)、胶皮管、支架、夹子,线虫滤纸,纱布、计数皿,解剖镜,小烧杯等。 2 主要试材:感染根结线虫病的植物病根或病土。 四、实验方法与步骤 该方法操作简单,是目前从植物材料中分离线虫较好的方法。具体方法如下: ①将玻璃漏斗架在铁架上,下面接一段橡皮管(长约10cm),橡皮管上装一个弹簧夹。 ②在漏斗内衬放一个用细铜纱制成的漏斗状网筛,将植物材料直接放在网筛中,分离土壤中的线虫时须在网筛上放一层纱布或滤纸,上面加一层土样。 ③沿壁缓慢的加入自来水,避免搅动土样,使下层的水浑浊。 ④打开弹簧夹,慢慢放出底部约5ml的水样于计数皿内。 ⑤在解剖镜下观察分离到的植物线虫并计数。若线虫数量太少,可将水样倒入离心管中,于1500r/min离心机中离心3-5分钟,倒掉上层清水,将下层沉淀物悬浮后,倒入计数皿中,在解剖镜下观察计数。计数皿为以特制的小玻璃皿,有分割的刻度,四周边缘适当倾斜。计数时在解剖镜下数出每个小格中线虫数,然后相加即总线虫数。 |
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