干货收藏版 | 细胞信号通路PI3K

孟子辉的书房 2022-11-02 发布于吉林

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导读

今天我们介绍一个在RTKs下游、与MAPK平行的另一个重要通路— PI3K通路。

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PI3K的组成与激活方式

图 1. PI3K的激活方式

P13K催化功能

图 2. PI3K催化的反应

PI3K激活后能够催化PIP2的3位羟基磷酸化生成PIP3，从而进一步促进下游通路；恰恰相反， 细胞中另一种酶PTEN则能催化这个反应的逆过程，并对PI3K下游的通路产生抑制作用。

PIP3生成后，可以充当第二信使，同时招募PDK1和AKT蛋白到质膜上，使PDK1磷酸化AKT蛋白的308号位的苏氨酸（T308）， 导致AKT部分活化。被活化的AKT将进一步激活下游调控通路。

PI3k-AKT 通路

图 3. PI3K-AKT及下游蛋白

AKT 是一类 AGC 家族的丝氨酸/苏氨酸激酶，主要包含3 个结构域：PH 结构域（对 PIP3 有亲和力，对与胞膜的结合至关重要）、催化结构域、调节结构域。AKT作为一种原癌基因，在多种细胞过程中发挥关键作用，如葡萄糖代谢，细胞凋亡，细胞增殖，转录和细胞迁移； PI3K/AKT 信号通路失调见于多种人类疾病，包括癌症、糖尿病、心血管疾病和神经疾病。

AKT下游作用的底物分类繁多，结合上图我们对主要的底物进行概述：

1、TSC2

TSC复合体（结节性硬化症复合体）包含三个亚基：TSC1，TSC2以及TBC1D7，能够负调控mTORC1复合体的活性，起到肿瘤抑制的作用。产生这种作用的主要原理是：TSC2包含的GTP酶活化蛋白（GTPase activating protein，简称GAP）结构域，将GTP形式的RHEB（RAS家族的一种小G蛋白）水解为GDP形式的RHEB，导致RHEB失活，不能激活mTORC1的激酶活性，从而抑制细胞生长。 而AKT诱导TSC2蛋白(tuberin) 的939位Ser和 1462位Thr磷酸化后，活性抑制，导致mTOR通路反而被激活；

2、BAD

BAD（Bcl2相关的细胞死亡激动剂）能够正向调节线粒体的凋亡，AKT磷酸化该蛋白后，BAD活性抑制；

3、MDM2

AKT能够通过磷酸化p53的泛素连接酶—MDM2而使其激活， 从而抑制p53产生的细胞周期阻滞与凋亡。

4、p21 和 p27

CDK抑制因子p21和p27是两个重要的细胞周期调节因子，在正常细胞 DNA受损伤时 , 被P53诱导产生，抑制DNA复制，增强DNA修复，起到抑癌作用。 而AKT磷酸化抑制这些CDK抑制因子后能够抑制其活性。

5、GSK3β

GSK3β（糖原合成酶激酶3β）是一种在进化上非常保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，参与肝糖代谢，在Wnt 通路中扮演重要的角色。正常情况下GSK3β可以磷酸化β-catenin使其经蛋白酶体降解， AKT磷酸化GSK3β后，导致GSK3β失活，不能再磷酸化β-catenin，致使β-Catenin在胞浆内大量聚集，从而进入细胞核并激活与细胞分裂和生长调控相关的基因（如c-myc和Cyclin D1等）。

6、IKK ( IκB kinase )

IKK ( IκB kinase ) 被AKT磷酸化激活， IKK进一步磷酸化抑制能够抑制NF-kβ途径的转录因子IκB（注意断句....），最终结果是： AKT正向调控了NF-kβ途径，从而对细胞生存、增殖、侵袭、血管生成和化疗耐药产生影响。

7、WEE1

CDK1抑制激酶—WEE1能够被磷酸化抑制，对有丝分裂产生影响。

8、ASK1

ASK1 （凋亡信号调节激酶1）是一种能够激活JNK信号通路（MAPK通路的一种，详情见第二期）的MAPKKK，与凋亡诱导，促凋亡和内皮网应激(ERS)有关， AKT磷酸化ASK1后，导致其活性抑制。

9、FOXO

FOXO是一种凋亡诱导转录因子，AKT磷酸化FOXO后导致其在细胞内重新定位并失去转录活性。

综上所述，我们可以看出： AKT所产生的效应最终结果大多引起细胞增殖及避免凋亡。

PI3K-AKT-mTOR 通路及TORC复合物

前面我们已经说过了， AKT能够通过抑制TSC2，间接导致RHEB激活mTOR增强。mTOR全称叫做哺乳动物雷帕霉素靶点（mammalian target of rapamycin， mTOR）。mTOR是一类丝/苏氨酸激酶，C端与磷脂酰肌醇激酶（PI3K）催化域同源，但是却不具备酯酶激酶的活性，而具有Ser/Thr蛋白激酶活性。 mTOR 能够形成两种复合物：TORC1和TORC2。

图 4. PI3K-AKT-mTOR通路

除了能被AKT激活外，mTOR还能根据细胞环境的能量与营养情况被激活或抑制。如上图所示， 当能量不足（AMP/ATP 比例增高）、缺氧时， TSC2、TSC1形成复合体增强， 抑制mTOR复合物形成。当溶酶体氨基酸过量时，H+-vATP酶能够激活带有鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEFs)的蛋白复合物Ragulator，从而促进TORC1的形成。

图 5. TORC1与TORC2

前面已经提到，mTOR有两种复合物： mTORC1 和 mTORC2。 mTORC1 由 mTOR、mTOR 调节相关蛋白 Raptor、MLST8 和非核心组分 PRAS40、DEPTOR 组成。mTORC2 由 mTOR、mTOR 帕霉素不敏感伴侣 RICTOR、MLST8 和 mSIN1 组成。这两种复合物的主要区别就在于：结合蛋白是Raptor还是Rictor以及相关蛋白是PRAS40还是mSIN1。其中， 前者的区别主要决定TORC1对雷帕霉素敏感，而TORC2对雷帕霉素不敏感；而后者的区别则在于：PRAS40是AKT的底物，而mSIN1是MAPK的底物。

从功能上来说， TORC2功能较为简单，它能够磷酸化AKT从而对mTOR产生正反馈，促进mTOR进一步活化（ 与前面PDK1的部分活化呼应）。 TORC1则不同，能够继续磷酸化下游多种底物，调控细胞生存、增殖、蛋白质合成、脂质生成、血管生成和自噬等生物过程。

TORC1 下游底物与效应

图 6. TORC1下游底物及效应

TORC1 与蛋白质合成

TORC1还可以先磷酸化激活下游AGC家族核糖体S6激酶（S6K1）， S6K1可以磷酸化激活核糖体S6蛋白（RPS6）、PDK1（AKT上游激动蛋白）、MDM2（p53抑制因子）、转录调节因子EEF2、接头蛋白IRS等，磷酸化抑制促凋亡蛋白BAD。最终的效应就是：避免细胞凋亡、促进蛋白质合成。

TORC1 与脂质合成

TORC1除了促进蛋白质合成外，还可以 磷酸化激活STAT3 (信号转导与转录激活因子3)促进细胞增殖； 激活SREBPs(固醇调节元件结合蛋白)和PPARα和γ(过氧化物酶体增殖物激活受体) 促进脂质合成。

TORC1 与血管生成

TORC1能够通过 激活HIF1α促进血管生成，而HIF1α也可以间接地激活TSC2，从而对TORC产生负调控作用。

TORC1与自噬

TORC1通过 磷酸化抑制下游底物ULK1等自噬相关蛋白，抑制自噬过程。

综上所述，TORC1通过磷酸化激活/抑制一系列底物，直接/间接提高了蛋白质和脂质的合成、促进细胞增殖，引起细胞和组织的生长。

PI3K-AKT-mTOR 与肿瘤

从上文我们可知，PI3K 通路可以通过多种途径避免细胞凋亡，促进其存活及增殖。 PI3K/AKT信号通路在肿瘤发生中广泛的激活，尤其是PIK3CA，PIK3R1，PTEN，AKT等基因存在高频突变（其中PIK3CA基因在大约36%的乳腺癌中存在突变），与肿瘤发生、发展以及耐药密切相关。

目前该通路的主要涉及的突变有：

1、PIK3CA突变

PIK3CA是肿瘤中编码 PI3K 蛋白 P110 亚基的基因，具有较高的突变比例。在前列腺癌、乳腺癌等多种癌症中，超过 10%以上的病例存在PIK3CA 突变。其中，激活型突变占80%以上。激活点突变可以让 PI3K 蛋白不依赖上游信号，而持续保持激活状态。 PIK3CA 突变被认为是 EGFR-TKI 治疗产生耐药的潜在原因之一。

2、PTEN突变

前文我们提到，抑癌基因PTEN能够产生与PI3K相反的效应，因此其突变也导致癌症发展。 在子宫内膜癌、脑癌、皮肤癌和前列腺癌中， 10%以上的病例存在 PTEN 基因突变。

3、AKT突变

AKT基因家族包括：AKT1，AKT2，AKT3。 AKT 在肿瘤中最常见的突变形式，是激活点突变和基因拷贝数异常增加。在乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌和膀胱癌中，有相当高比例的病例。