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尽管病理学的技术已经发展到了分子时代，但是“冰冻切片”(frozen section,FS)这样一个医院里手术科室常用的术语，从1905年出现在医学文献后的100多年以来，目前仍然是一个令病理医生望而却步的需要攀登的医学高峰。之所以将术中冰冻病理诊断列为病理诊断中的高难度事件，主要有几个显而易见的因素所决定：时间的限制（30分钟左右，来不及查阅资料或仔细推敲）；通常无人商量（常规病理诊断一旦遇到困难时可以开展多个医生间的讨论和会诊）；切片质量不佳（由于是采用新鲜组织快速冷冻后直接刀切的物理方法，切片质量达不到常规病理组织学制片的水平，常常产生许多人工假象而误导诊断）。本文就冰冻切片质量问题进行探讨。 首先介绍冰冻切片技术与石蜡切片技术的概念：冰冻切片技术（又称冷冻切片技术）可被称为病理科的急诊工作----在外科手术过程中，医生切取部分肿瘤组织或其它病变标本，送检到病理科通过快速冷冻标本制作切片，病理科诊断医师对该切片进行观察快速做出判断得出良、恶性结果或某种疾病的诊断，从而指导临床医生做出下一步手术方案的选择。石蜡切片技术是病理科一项常规病理工作，临床医生切取的离体组织送检到病理科，经过取材、固定、脱水、浸蜡、包埋、切片和染色等一系列技术处理所得到的切片，病理医生对其做出最终诊断的病理技术。其全过程大约在3-5天左右完成。那么，冰冻切片与常规石蜡切片有什么区别呢？简单介绍如下： 1、用途不同：①冰冻切片用于术中病理诊断，达到迅速做出诊断，包括良、恶性、切缘及淋巴结转移情况。所以要求病理诊断医师具有高年资病理诊断经验，取材部位精准， 病理技术人员具有冰冻切片的经验。②石蜡切片用于术后病理诊断，要求离体组织及时固定，保持组织原有结构及成分固定在原有位置，经过一系列技术处理，通过这些处理可以使得切片在显微镜下清晰的辨认其形态结构，组织细胞形态结构保存良好，可以帮助医生更加准确的做出诊断。同时石蜡切片对标本的长期保存非常适合。 2、制作方式不同：①冰冻切片要求送检新鲜组织，采用低温恒冷切片机，将取材组织置于-25℃冷冻箱内速冻3-5分钟，切8微米厚度切片，固定后水洗直接染色，针对不同组织采用不同温度进行切片。②石蜡切片--送检组织用10%中性福尔马林固定，标准取材后，置入全自动脱水机进行脱水、透明、浸蜡，再进行包埋、切片，厚度3-5微米，将切片烤片后，置入全自动染色机进行染色。 3、镜下观察不同（如图1-2）：①冰冻切片---因为冷冻组织未经过固定是新鲜组织冷冻切片，所以切片镜下细胞、组织略显肿胀，诊断准确率95%以上。②石蜡切片---因为组织块经过10%中性福尔马林固定，酒精梯度脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，所以切片平整、颜色鲜艳、细胞组织结构清晰可见，诊断准确率99%以上。
在实际工作中，冰冻切片制作过程中常有许多因素影响冰冻切片的质量，冰冻切片冷冻速度太慢，冷冻时间太长，容易结成冰晶，大量冰晶把染色质挤到细胞核边缘，冰晶融化后会出现空洞，影响抗原定位。这种情况往往容易出现在核染色质分散，向核周围聚集，核染色质被挤于核膜下的细胞。所以这种现象易造成错误认识细胞形态，不利于医生进行诊断。另外，冰冻切片较石蜡切片制作厚，做出来的切片没有石蜡切片清晰漂亮。由于冰冻切片存在质量和时间上的限制，冰冻切片病理诊断对肿瘤的分型不一定非常准确，对部分无法确定组织学类型的病例，还需要等待常规的石蜡切片予以确诊。基于以上冰冻切片与石蜡切片的区别，制作冰冻切片的注意事项如下： 1、减少冰晶形成：切片前组织不能经过任何固定剂浸泡，也不能接触水份，应保持干净，甚至我们可以用滤纸把组织表面的水份吸取干净，可以大大减少冰晶的形成。未固定的新鲜组织在低温下迅速冷冻，即所说的骤冷，这样可以尽量缩小冰晶，以保持组织原来的结构。 2、保持切片完整：①有脂肪组织应降低冰冻点，例如乳腺肿瘤标本常带有脂肪组织，冰冻温度应-30～-35℃。②当切片时发现组织较脆时应提高冰冻温度，或在室温停留片刻，例如肝脏、甲状腺标本。③切片刀钝或较脏时切片出现刮痕，使切片不完整，应及时更换新刀。 3、防止切片卷缩：调节好防卷板，保持防卷板干净、平整、无缺损、无划伤。采取相应措施去除静电，切片时间过长时，应注意间隔一会，盖上冷冻室盖，降低防卷板温度。 4、载玻片黏贴：载玻片应放在常温的地方，不可放在冷冻仓室中，这样可以保持冰冻组织片与载玻片有一定的温差，有利于切片的附贴，防止脱片的发生。载玻片应保持干净。 5、选择适合标本：骨组织没有脱钙，不适合冰冻切片，纯脂肪组织很难冰冻切片，一般厚度不能成片，需要厚一些可切成片；固定后的组织很容易脱片，不能进行冰冻切片，微小组织（小于2MM）不适合冰冻切片。 总而言之，冰冻切片特点是快速，与石蜡切片比清晰度差，给诊断增加难度，风险就高，所以在快速冰冻制片的过程中必须严格按照操作进行，尽量避免冰冻切片的常见问题。 审核：程新宇 主任技师 沈阳医学院附属中心医院病理科 编辑：常青
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