国务院联防联控机制综合组12月8日公布《新冠病毒抗原检测应用方案》,明确所有人员均可按自主自愿原则,随时进行自我抗原检测。那么您知道新冠病毒抗原检测的原理吗? 胶体金检测法是一种定性检测方法,其中涉及了抗原抗体的特异性反应,即某种抗体专一性的识别结合某种抗原。 但抗原抗体的结合人的肉眼并不可见,因此将抗体与胶体金进行偶联。胶体金是金盐被还原成金单质后形成的金颗粒悬浮液,通常为红色,并且在碱性条件下表面带负电,因此可以与带正电的物质结合(如新冠病毒抗体),这两个特性使肉眼无法看见的新冠抗体可以通过胶体金的颜色进行呈现。 新冠病毒抗原检测板上面分为四个部分。第一部分是样品孔,第二部分是胶体金纳米颗粒与新冠病毒抗体①的偶联物,第三部分是固定有新冠病毒抗体②的条带(标记为T,即Test,检测线),第四部分固定的是能特异性结合新冠病毒抗体的另一种抗体(标记为C,即Control,质控线)。 T线显色的原理: 加样后,样品向前流动,抵达第二部分时,若样品中含有新冠抗原,胶体金偶联的新冠病毒抗体①会识别并结合新冠抗原,样品继续向前流动,到达T线时,T线的新冠病毒抗体②也会结合新冠抗原。 即形成“T线抗体②—待测抗原—胶体金偶联抗体①”的三元复合物,大量的胶体金在此处固定,显示出红色条带,判断为阳性。如果样品中没有新冠抗原时,T线的新冠抗体是无法抓住胶体金偶联抗体的,T线不显色,并判断为阴性。 C线显色的原理: 样品向前流动带动胶体金颗粒向前移动,过量的胶体金颗粒到达C线后,其偶联的新冠病毒抗体①与C线的抗体结合,大量积聚后显色红色。若C线出无红色条带,说明抗原检测板质量出现问题,检测结果不可信。 “抗原检测”检测的是什么? 病毒就像一颗包裹着橡皮糖夹心的什锦软糖。 “橡皮糖夹心”位于病毒体的中心,主要成分为核酸(ssRNA),为病毒的复制、遗传和变异提供遗传信息。 外层的“软糖”是病毒体的蛋白质外壳,称“核衣壳”(N),可保护病毒核酸免受外界因素的破坏,并能介导病毒进入宿主细胞。 而入口之前,“软糖”外包裹的一层“糖衣”便可以理解为病毒体的包膜,它是包绕在病毒核衣壳外面的双层膜。 新型冠状病毒的这层“糖衣”异常绚丽,其膜上有刺突糖蛋白(S)、包膜蛋白(E)和膜蛋白(M)。 在这些结构蛋白中,N蛋白在不同SARS-CoV-2病毒株系中高度保守,且具有良好的免疫原性,为病毒侵染细胞后表达量最高的结构蛋白,是良好的检测生物标志物。 目前,新型冠状病毒抗原检测一般以检测N蛋白为主。 新冠病毒抗原检测原理 假设这是一份存在新冠病毒特定抗原(N蛋白)的口咽/鼻咽拭子,经拭子处理液的释放洗脱后,N蛋白随着处理液被滴入样品孔。 待测样本在纸纤维所形成的毛细力拉动下,从试纸的一端流向另外一端。在此过程中,N蛋白将经历三道关卡。 备注:第一关卡:金标抗体(金标记2019-nCoV抗体);第二关卡:T线抗体(2019-nCoV抗体);第三关卡:C线抗体(“金标记2019-nCoV抗体”二抗)。 样本在毛细管作用下沿着检测卡加样孔端向前移动,如果样本中含有新型冠状病毒抗原,抗原将结合胶体金标记的新冠 N 蛋白抗体 MAb1,形成新冠病毒抗原-胶体金标记抗体复合物,复合物随样本继续迁移到硝酸纤维素膜上,被固定在硝酸纤维素膜上的另一个新冠 N 蛋白抗体 MAb2 抗体捕获,形成紫红色的检测线(T 线),显示新型冠状病毒抗原阳性;如果检测线(T 线)不显色,则表示新型冠状病毒抗原阴性。 检测卡中还包含一条质控线 C 线,无论样本中是否含有相应的待测物,紫红色的质控线(C 线)都会出现,用于判读层析过程是否正常。 质控: 用于判断是否有足够样本,层析过程是否正常,金标新冠抗体随液体层析到质控区(C)时被羊抗鼠新冠抗体捕捉形成金标新冠抗体-抗新冠抗体复合物,在质控区(C)形成红色条带。 【生物动画】病毒抗原检测原理(胶体金法)胶体金即胶体纳米金,是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂(如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等)作用下,聚合成一定大小的金颗粒,在静电的作用下成为稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液。 胶体金法和乳胶法的操作流程基本类似,以双抗夹心法为例: |
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