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核糖核酸酶A是内切核糖核酸酶，可特异地攻击RNA上嘧啶残基的3'端，切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键。反应终产物是嘧啶3'磷酸及末端带嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。无辅因子及二价阳离子存在时，核糖核酸酶A的作用可被胎盘RNA酶抑制剂(B1ackburn et al．1977)或氧钒—核糖核苷复合物(Puskas et al．1982)所抑制。 应特别注意酶的处理，因为它与玻璃表面的亲和力。该酶保持活性，但在冻干时聚集，并在低离子强度的温度≥2°C的溶液中聚集。RNase A的加热溶液使DNA酶失活可能不令人满意，因为如果发生沉淀形成并且热处理的DNase可能会随着时间的推移重新激活，RNA酶活性可能会丧失。代码： RPDF 适用于需要最低 DNase 和蛋白酶水平且无需进一步处理的应用。代码： RAF在某些应用中无需处理即可使用。要热处理 RAF，请使用 10mM 乙酸盐 pH 5.0 和或不带 15mM CaCl 2 在 15°C 或更长时间下在 100°C 下 80 分钟。 如果在中性pH下加热，可能会沉淀。代码的热处理：由于磷酸盐的存在，RASE会沉淀。 核糖核酸酶A测定： 方法 由于反应发生的速率不同以及从生物来源分离的RNA中核苷酸模式的显着差异，核糖核酸酶活性的标准化一直很困难。克鲁克等.（1960）发表了一种使用合成底物胞苷2'，3'-磷酸的测定。Zimmerman和Sandeen（1965）描述了使用聚胞苷酸的灵敏测定。 卡尔尼茨基等人的方法。（1959）在沃辛顿使用。pH 5.0 下酵母 RNA 的水解速率是通过测量在规定条件下释放的酸溶性寡核苷酸的量来确定的。一个单位导致吸光度在 A 时增加 1.0260在37°C和pH 5.0的特定条件下。 试剂 0.10 M 醋酸钠缓冲液，pH 5.0 25%高氯酸，含0.75%乙酸铀酰 1%沃辛顿酵母RNA在0.10M乙酸钠中，pH 5.0。测定前平衡至37°C。 酶 在试剂级水中以 1 mg/ml 制备储备溶液。在测定前，在pH 2.4的6.0M乙酸钠中进一步稀释至每毫升10，5和0微克。 程序 将一毫升相应的酶稀释液移入离心管中。包括含有一ml 0.10 M乙酸钠缓冲液，pH 5.0的空白。将所有试管在 37°C 下孵育 5-8 分钟。每隔一段时间，加入一毫升1%的RNA。将每个试管孵育4分钟，并通过加入一ml乙酸铀酰-高氯酸溶液停止反应。转移到冰浴中冷却5分钟。通过离心澄清并用试剂级水将0.1ml透明上清液稀释至3.0ml。阅读 A260与空白。 核糖核酸酶 A部分引用文献： Aktipis, S. and Iammartino, A. Photochemical Modification of Aromatic Residues in Irradiated Ribonuclease , Biochim Biophys Acta 278 , 239 , 1972 Allewell, N. and Sama, A. The Effect of Ammonium Sulfate on the Activity of Ribonuclease A , Biochim Biophys Acta 341 , 484 , 1974 Alonso, J. , Nogues, M. and Cuchillo, C. Modification of Bovine Pancreatic Ribonuclease A with 6-Chloropurine Riboside , Arch Biochem Biophys 246 , 681 , 1986 核糖核酸酶 A相关研究： 无核酸酶白蛋白 脱氧核糖核酸酶 I （DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF） 组蛋白 （H， NHL） 溶菌酶 （LY/LYSF） 微球菌核酸酶 （NFCP） 核酸酶，S1 （中新/中核酸） 核酸，DNA，大肠杆菌，λ/片段，RNA磷酸酶，碱性（CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC）磷酸二酯酶 I （VPH） 磷酸二酯酶 II （SPH） 蛋白酶 K （PROK/PROKS）逆转录酶，重组 HIV （RTHIV） 核糖核酸酶 T1，无动物源性 （RT1S） |
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