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作者：梁晨 唐神结
单位：首都医科大学附属北京胸科医院 北京市结核病胸部肿瘤研究所 结核病临床医学中心 引用本文: 梁晨, 唐神结. 临床结核病病原体分子生物学诊断年度进展2022 [J] . 中华结核和呼吸杂志, 2023, 46(2) : 176-182. DOI: 10.3760/cma.j.cn112147-20221030-00857. 结核病仍然是威胁人类健康的全球公共卫生问题，快速准确的病原体检测是实现早期诊断和有效治疗的关键。近年来，结核病的病原学诊断由传统的细菌学诊断向分子诊断扩展。近1年，具有良好诊断性能的Xper MTB/RIF Ultra技术更多被应用于非呼吸道样本的检测，Xpert XDR和二代线性探针技术为MDR-TB的早期快速准确诊断提供了更多依据；基因组测序技术也被更多开发应用于非培养物样本的检测，其检测成本和所需时间已相对降低和减少；更适合初级医疗保健中心开展的Truenat技术被更广泛应用；游离DNA检测及质谱检测等新型结核病检测技术同样不断发展，有望成为结核病及耐药结核病早期快速诊断的重要手段。本文综合2021年10月1日至2022年9月30日国内外结核病病原体分子生物学诊断的重要进展成果，评估分子生物学检测技术的优缺点及应用现状，为临床选择和应用提供重要依据。 结核病（tuberculosis）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）引起的慢性传染性疾病，仍然是威胁人类健康的全球公共卫生问题，早期准确的诊断和有效的治疗是控制结核病传播与流行的关键。传统的痰抗酸杆菌染色涂片和MTB培养方法或敏感度不高或耗时较长，严重影响了结核病的早期快速诊断。耐药MTB的出现和传播更增加了结核病诊断和治疗的复杂性。近年来，结核病的病原学诊断由传统的细菌学诊断向分子诊断扩展，分子生物学的精准诊断为结核病特别是耐药结核病的早期快速诊断提供了强有力的依据。本文综合本年度国内外结核病病原体分子生物学诊断技术的重要进展成果，评估分子生物学检测技术的优缺点及应用现状，为临床选择和应用提供重要依据。MTB/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测（GeneXpert MTB/RIF，简称Xpert）技术是目前荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术的典型代表。该技术针对rpoB基因81 bp利福平耐药决定区（rifampicin resistance determining region，RRDR）设计引物、探针完成对MTB和利福平耐药的检测，该技术已经成为对成人、儿童肺结核和肺外结核病以及利福平耐药结核病的重要诊断手段。但由于该技术对于含菌量低的标本检测的敏感度较低，限制了其在痰抗酸染色涂片阴性肺结核和肺外结核患者中的使用，近年来开发研制的新一代超敏感Xpert（GeneXpert MTB/RIF Ultra，简称Xpert Ultra）技术弥补了此不足，Xpert Ultra检测的低限为16菌落形成单位（colony-forming units，CFU）/ml，明显低于Xpert（114 CFU/ml），显著提高了诊断的敏感度。然而，Xpert Ultra是否可以替代Xpert还需要更多支持性证据。近一年的研究结果显示，Xpert Ultra对菌阴肺结核、儿童结核病及肺外标本的检测具有较好的敏感度，扩展了检测标本的来源。在Xpert阴性但胸部影像学表现为肺结核的979例患者中，Xpert Ultra可检测到额外阳性结果45例（4.6%）［1］。一项印度的研究结果表明Xpert Ultra检测对痰、淋巴结、脑脊液、体液、脓液、组织或骨骼、骨髓、尿液检测诊断结核病的敏感度分别为75.5%、81.2%、38.5%、48.1%、92%、63.2%、42.9%、45.8%，特异度为94.8%~100%，Xpert Ultra对不同样本检测总体的敏感度（87.8%）高于Xpert（72.1%）和培养（44.1%），特异度（98.1%）低于Xpert（100%）和培养（100%）［2］。另外，成人粪便样本的Xpert Ultra检测对无创早期诊断肺外结核病和痰抗酸染色涂片阴性肺结核同样具有一定价值。一项荟萃分析结果表明，Xpert Ultra检测粪便样本对于诊断痰抗酸染色涂片阴性肺结核、颈部淋巴结结核、腹部结核病患者的敏感度分别为100%、27.27%、50.00%［3］。国内一项前瞻性的研究结果显示，Xpert Ultra检测后口咽唾液对诊断少菌性肺结核的总体敏感度为78.9%，特异度为96.6%，在支气管镜检查之前进行后口咽唾液检测会减少支气管镜检查的必要性和护理成本［4］。国外乌干达的一项研究结果也表明，相对于基于复合痰培养的参考标准，Xpert Ultra对单个唾液样本的敏感度达90%，类似于显微镜对2份痰抗酸染色涂片上抗酸杆菌的复合敏感度（87%）。在HIV感染者中，Xpert Ultra检测唾液诊断结核的敏感度为71%，比无HIV感染者低24%，痰抗酸染色涂片阳性患者唾液Xpert Ultra的敏感度为96%，而痰抗酸染色涂片阴性患者仅50%，尽管如此，唾液检测在高结核负荷环境中几乎与痰分子检测一样敏感，是一种可行且敏感的结核病诊断痰替代品［5］。一项回顾性多中心研究比较了Xpert Ultra和Xpert检测肺结核患儿痰标本的准确性，Xpert Ultra的敏感度为41.4%（24/58），高于Xpert（24.1%，14/58），两者特异度均为97.9%［6］。因此，Xpert Ultra检测可以提高肺结核患儿的确诊率，从而减少误诊，并能给予及早抗结核治疗，提高治愈率。然而，肺结核患儿痰标本获取困难，常需要诱导产生，给早期诊断带来一定影响。而Xpert Ultra检测其他样本的敏感度和特异度也较高，包括支气管肺泡灌洗液、鼻咽分泌物、胃液和粪便等，从而在一定程度上解决了儿童结核病诊断的难题［7, 8］。对于重症艾滋病合并结核病患者，血液Xpert Ultra检测对于诊断以及评估预后均具有重要价值［9］。一系列研究表明，Xpert Ultra可显著缩短结核病及利福平耐药结核病的诊断时间，提高敏感度，尤其对菌阴肺结核和肺外结核的早期快速诊断具有重要作用，但其较高的敏感度导致其特异度降低；假阳性结果的原因，除了样本污染，还可能是患者治疗后期的痰液等标本中非活性MTB被识别而导致。因此临床医生在参考复治结核病患者实验室检查结果时，需要综合结核病临床病史、症状体征及其他实验室检查结果进行综合评估。目前，Xpert Ultra在我国临床应用还很少，需要积累更多的数据与经验。Xpert Ultra和Xpert仅可用于诊断利福平耐药结核病，而对于耐多药结核病（multidrug-resistant tuberculosis，MDR-TB）和广泛耐药肺结核（extensively drug-resistant tuberculosis，XDR-TB），目前能够利用的分子诊断技术不多。Xpert MTB/XDR 检测（简称Xpert XDR技术）是Ultra的下一代检测技术，可用于检测异烟肼、氟喹诺酮类、乙硫异烟胺和二线注射类药物（阿米卡星、卡那霉素、卷曲霉素）的耐药基因突变 ［10］。据世界卫生组织评估来自3项研究的1 605例细菌学确诊肺结核患者结果显示，Xpert XDR检测异烟肼耐药性的总体敏感度为94.2%，特异度为98.0%。对氟喹诺酮类药物耐药性检测的总体敏感度为93.1%，特异度为98.3%。对阿米卡星耐药性检测的总体敏感度为89.1%，特异度达99.5%。据此，世界卫生组织批准了该技术作为耐药结核病的补充诊断手段。来自一项前瞻性多中心诊断准确性研究显示，Xpert XDR对异烟肼耐药检测的敏感度为94%（460/488，95%CI：92%~96%），氟喹诺酮类药物为94%（222/235，95%CI：90%~96%），阿米卡星为73%（60/82，95%CI：62%~81%），卡那霉素为86%（181/210，95%CI：81%~91%），卷曲霉素为61%（53/87，95%CI：49%~70%），所有药物的特异度为98%~100%，其诊断效能与线性探针分析相当。表明Xper XDR技术具有较高的诊断准确性，能够快速准确诊断耐药结核病，并据此给予最佳治疗方案［11］。尽管Xpert XDR是一种很有前途的诊断方法，但仍需对不同来源的临床标本的检测效能进行进一步评估，包括特殊人群，如HIV携带者和儿童。Xpert XDR检测的一个主要缺点是无法对新药的耐药性进行检测，根据WHO对XDR-TB新的定义，Xpert XDR与Xpert Ultra和Xpert相结合也仅可诊断pre-XDR-TB，因此，对于新药仍需要结合基因型和表型方法来监测其耐药性。二、二代线性探针技术（line probe assay，LPA） LPA主要是利用生物素化的引物进行PCR扩增，扩增产物与固定于膜上的特异性寡核苷酸探针杂交，根据酶联免疫比色进行结果解读。LAP既能用于MTB检测，也能用于药物耐药突变检测。2008年，WHO批准LPA用于结核病以及利福平和异烟肼的耐药性检测。二代LPA或称二线药物LPA（second-line LPA）可以检测氟喹诺酮类、氨基糖苷类和环多肽类等药物相关基因突变，可直接用于临床标本的检测并在5 h内完成［12］。一项荟萃分析显示，LPA对MTB检测的敏感度、特异度分别为89%、94%；对利福平耐药、异烟肼耐药、MDR、二线药物、pre-XDR TB诊断的敏感度分别为96%、91%、93%、83%、67%，特异度分别为99%、99%、100%、98%、91%。LPA在诊断结核病和耐药结核病方面具有良好的诊断性能，尤其是对利福平耐药结核、异烟肼耐药结核和MDR-TB［13］。最近有研究评估了二代LPA诊断莫西沙星耐药的准确性，在以表型药敏（phenotypic testing culture based drug susceptibility test，pDST）的临界浓度（莫西沙星0.25 mg/L）为参考时，二代LPA与pDST诊断莫西沙星耐药的一致率为94%（104/111）。然而，以pDST的临床分界值（莫西沙星1.0 mg/L）为参考时，二代LPA与pDST诊断莫西沙星耐药的一致率仅为78%（36/46），二代LPA结果与全基因组测序技术（whole genome sequencing，WGS）的结果与完全一致。但是，二代LPA对莫西沙星耐药结果的分层与pDST（以临床分界点为参考）的相关性不是很好，仍需要对大量样本进行进一步研究［14］。但对于肺外结核病、pre-XDR-TB和儿童结核病诊断的研究还不够，还需要进一步验证。此外，对于探针技术的核酸诊断方法，应考虑其成本以及对技术人员和实验室基础设施的要求。随着分子生物学技术的飞速发展，基因测序可以提供特定基因的序列或完整准确的基因组信息。二代测序技术（next generation sequencing，NGS）是一种基于基因序列的病原微生物的鉴定方法，成功应用于生物体的常规表征、基因分型和结核病的流行病学调查。NGS不仅可用于诊断结核病，还能同时检测MTB对8类抗结核药物的抗性相关突变［15］。NGS与常规BACTEC MGIT 960 DST在确定吡嗪酰胺（Pyrazinamide，PZA）耐药性方面非常一致（91.8%），其敏感度（89.5%）和特异度（95.7%）均较高［16］。国内也有研究结果表明，与表型药敏结果相比，在痰标本中使用NGS方法对异烟肼、利福平、卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星耐药表型具有较好的检测效能，其敏感度分别为85.71%、91.67%、100%、87.50%、100%，因此在痰液标本中直接进行NGS耐药检测可实现耐药结核病的早期快速诊断［17］。NGS对肺外标本脑脊液中MTB检测的敏感度达到65.79%~84.10%，特异度也较好，大大提高了结核性脑膜炎的快速诊断率，有利于启动早期抗结核治疗，提高了治愈率、降低了病死率和致残率［18, 19］。国内一项研究表明，NGS可在病理组织标本中实现对药物敏感度的检测，对大多数药物尤其是异烟肼和利福平耐药性检测的敏感度较高［20］。由于NGS的临床应用时间还较短，对于NGS检测的临床意义还不明确，NGS检测的序列数多少才有诊断价值、检测出哪些病原体才具有临床意义、什么样标本比较可靠等问题均需要今后进一步大样本多中心的临床研究。基于NGS的WGS可预测未知基因组序列，获得MTB的全基因组序列信息，不仅可以进行菌种鉴定及耐药性分析，还可以分析MTB间的系统进化关系、感染源以及个体间的传播过程、分子流行病学特征分析等［21, 22］。最新的研究表明，与传统表型药敏试验结果相比，WGS对利福平、异烟肼、氧氟沙星、莫西沙星、链霉素的敏感度均>90%，对乙胺丁醇、吡嗪酰胺敏感度分别为85.71%和66.67%，而对卡那霉素和阿米卡星耐药检测的敏感度均为50%。其检测一致性分别为：利福平（92.9%）、异烟肼（93.4%）、乙胺丁醇（89.6%）、链霉素（73.1%）、莫西沙星（94.0%）、氧氟沙星（93.4%）、阿米卡星（68.7%）、卡那霉素（68.7%）、丙硫异烟胺（87.4%）、对氨基水杨酸（96.2%）、环丝氨酸（84.6%）［23, 24］。表型和基因型DST之间仍存在部分药物不一致结果，pDST可以作为WGS的补充，以识别抗结核药物相关基因（如异烟肼、对氨基水杨酸、利福布汀）中的非高度可信突变，并最终确定MTB分离株的药物敏感情况。由于WGS的检测要依赖 MTB的培养，因此速度缓慢，这也是WGS的不足之处。近期有研究表明，早期阳性液体培养物的WGS也可用于预测MTB的耐药性。另一方面，对于部分抗结核新药的耐药机制在体内外的环境中均还未完全阐明，而WGS可用于明确其耐药基因的突变情况，如贝达喹啉耐药突变基因Rv0678和glpK［25］。WGS对于未知基因突变的检测具有一定优势，但是这种检测方式设备昂贵、数据分析量大、技术专业方面要求标准高，限制了其在临床诊疗中的应用与推广，虽然近1年来，WGS的成本和所需时间已相对降低和减少，后期分析也有商业化的产品，但仍有待进一步优化。Truenat技术是一项基于微量逆转录PCR和核酸杂交芯片相结合的结核病及耐药结核病分子检测技术，包括Truenat MTB、MTB Plus、MTB-RIF Dx 3个即时检测平台，是在全球创新诊断基金会（the Foundation for Innovative New Diagnostics，FIND）提供技术支持下由印度医疗器械制造商Molbio Diagnostics公司开发研制的。Truenat MTB、MTB Plus可替代痰抗酸染色涂片镜检用于结核病的快速诊断，而Truenat MTB-RIF Dx则可用于诊断利福平耐药结核病。2020年1月该技术已被WHO推荐作为肺结核初始诊断以及进一步作为利福平耐药结核病诊断的一种可供选择方法。目前，Truenat技术已在全球40多个国家使用，是种更适合中低收入结核病高流行背景国家使用的检测技术，但还未在我国推广使用。近1年，Truenat技术的检测性能在不同地区的更多人群中被验证，结果表明，Truenat MTB、MTB Plus诊断结核病的总体敏感度可分别达83%和89%，总体特异度达到99%和98%；Truenat MTB-RiF Dx 诊断利福平耐药结核病的总体敏感度为93%，总体特异度达95%；其诊断效能与Xpert及Xpert Ultra技术大致相仿［26, 27, 28, 29, 30］。一项包括秘鲁、印度、埃塞俄比亚和巴布亚新几内亚4个国家19个初级卫生保健中心和7个参考实验室在内的前瞻性多中心研究发现，Truenat MTB、Truenat MTB Plus检测抗酸染色涂片阳性痰标本的敏感度分别为91.0%~95.8%和96.0%~98.3%，检测抗酸染色涂片阴性痰标本的敏感度分别为36.0%~44.5%和46.5%~57.3%。Truenat MTB-RIF Dx检测抗酸染色涂片阳性和阴性痰标本的敏感度分别为46.5%~57.3%和86.7%~87.1%。Truenat MTB、MTB Plus和MTB-RIF Dx的特异度在94.7%~97.7%。作者认为，该技术适合于基础设施非常有限的初级医疗保健中心开展使用。Ngangue等［27］研究发现，251例痰病原学培养阳性肺结核患者，Truenat MTB Plus检测痰标本的敏感度为91%，与Xpert相似（90%）。74例HIV阳性的痰病原学培养阳性肺结核患者，Truenat MTB Plus检测痰标本的敏感度为85%，而Xpert 的敏感度为81%。47例痰抗酸染色涂片阴性患者中，Truenat MTB Plus检测痰标本的敏感度为55%，与Xpert相似（53%）。Truenat MTB Plus检测的总特异度为96%，Xpert为99%。表明Truenat MTB Plus用于诊断肺结核病包括HIV感染者均具有与Xpert MTB/RIF同样高的准确度。但与Xpert技术相比，Truenat技术只有在样本测试结果为结核病阳性时才会进行利福平耐药性检测，这样节省了试剂、降低了成本。Truenat技术不仅可用于诊断肺结核，还可对活检标本进行检测用于快速诊断胃肠道结核病［30］。Truenat技术整个检测过程只需1 h，大大缩短了诊断时间。另外，该技术为由电池提供电源的手持设备，便于携带、方便使用，检测成本较低，更适合于中低收入结核病高流行背景国家开展应用，相信不久将会在我国推广应用。MTB游离DNA（MTB cell-free DNA，MTB-cfDNA）检测技术是近年来发展起来的一项新分子生物学诊断技术。MTB-cfDNA是MTB死亡或凋亡后释放到细胞外的小分子DNA片段，可存在于血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液及各种体液中。MTB-cfDNA检测技术以IS6110、gyrB和esxB等基因为靶标，检测方法多采用实时荧光定量或数字或半巢式PCR方法，也有采用PCR-成簇规律间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）方法和二代测序技术等［31, 32, 33, 34, 35, 36］。不少研究发现，MTB-cfDNA检测技术检测血清、尿液、胸腔积液和脑脊液等样本中的MTB-cfDNA的敏感度和特异度均较高，有些甚至高于Xpert MTB/RIF技术，对于儿童结核病以及少痰或无痰的肺结核和肺外结核患者更为适合，并且可用于肺结核和肺癌的鉴别诊断［27, 28, 29, 30, 31, 32］。Huang等［31］研究表明，采用PCR-CRISPR方法检测血清中MTB-cfDNA 还可以提高临床诊断结核病病原学阳性率。在HIV阴性病原学及临床确诊的结核病例中，PCR-CRISPR检测血清中MTB-cfDNA的敏感度为96%，特异度为94%。在包括6例肺外结核的儿童队列中，其敏感度为83%，特异度为95%。在HIV阳性确诊结核病例中，敏感度为100%；未确诊结核病例中，敏感度为85%。结果还发现，MTB-cfDNA阳性HIV患者6个月死亡风险较阴性患者高出2.4倍。随着抗结核治疗的进行，结核病患者血清MTB-cfDNA信号逐渐减弱，治疗6个月后MTB-cfDNA几乎完全被清除。作者认为，采用PCR-CRISPR方法检测血清中MTB-cfDNA可提高儿童结核病及HIV合并结核病的早期快速诊断，提高临床诊断结核病病原学阳性率。有研究显示，MTB-cfDNA没有基因组DNA稳定，在经过抗结核治疗后会很快被免疫细胞清除或迅速降解，因此，检测到MTB-cfDNA能反映当前的疾病活动状况，有可能成为监测治疗效果的一项指标［31］。然而，目前对MTB-cfDNA的了解还不够深入，检测到MTB-cfDNA是否均意味着存在结核病或结核病是否处于活动期，尤其是对于血液及尿液标本（泌尿系结核除外）。从现有的研究来看，MTB-cfDNA检测技术的敏感度是非常高的，方法相对简单，价格也较低廉，今后需要大样本前瞻性研究来明确其诊断结核病的特异度及其临床意义。六、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS）检测 MALDI-TOF MS是近年来快速发展起来的一种具有高通量特点的生物检测技术，可以用于MTB和非MTB的菌种鉴定，具有分辨率高、快速、准确、需要菌量少的优点，在2004年首次被使用检测MTB。另外，MTB在宿主体内药物敏感性的异质性可能会混淆药物敏感性的表型和分子诊断结果，甚至导致治疗失败，而MALDI-TOF MS具有识别MTB药物敏感性异质性的优势，在预测MTB的耐药性方面具有良好的性能。最新的一项研究表明，核酸MALDI-TOF MS检测菌株耐药的总体检测敏感度和特异度分别为：利福平92.2%和100.0%，异烟肼90.9%和98.6%，乙胺丁醇71.4%和81. 2%，链霉素为85.1%和93.1%，阿米卡星为94.0%和100.0%，卡那霉素为77.8%和99.3%，氧氟沙星为75.0%和93.3%，莫西沙星为75.0%和93.3%。MALDI-TOF MS抗菌药敏试验（AST）和表型AST的一致性为94.6%（利福平）、90.1%（异烟肼）、79.2%（乙胺丁醇）、89.9%（链霉素）、99.4%（阿米卡星）、97.0%（卡那霉素）、88.1%（氧氟沙星）和88.0%（莫西沙星）［37］。一项纳入202例复治结核病患者研究中，MALDI-TOF MS检测到60个拷贝的MTB基因突变，耐药基因突变菌株占阳性耐药菌株的34.68%（60/173）。利福平相关rpoB基因突变占86.67%（52/60），异烟肼相关katG+inhA基因突变占80.00%（48/60），inhA-15基因突变占8.33%（5/60），链霉素相关rpsL基因突变占28.33%（17/60），乙胺丁醇相关embB基因突变占45.00%（27/60），喹诺酮类药物相关的gyrA基本突变占26.67%（16/60），乙酰/丙基硫胺素相关的embB基因突变占36.67%（22/60），inhA-15基因突变占10.00%（6/60），氨基糖苷类药物相关rrs基因突变占26.67%（16/60），对氨基水杨酸盐、利奈唑胺未发现突变基因。多基因突变株占耐药株的63.33%（38/60）。对于相关基因突变比例高的耐药检测MALDI-TOF MS的敏感度更高（>80%，异烟肼、利福平、乙胺丁醇），对于相关基因突变比率低或没有相关基因突变的耐药检测敏感度更低（<80%，链霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、阿米卡星、卡那霉素、卷曲霉素）。这个结果可能表明，在使用MALDI-TOF MS筛选MTB耐药性时，药物类型存在一些限制，相关耐药基因突变少于45%的药物可能会降低这种方法的敏感度［38］。尽管如此，这是一种快速有效的MTB耐药筛查方法，为临床提供准确、及时、有效的实验室检测，使患者得到及时有效的治疗，节约医疗成本，控制传播和预后，具有良好的临床应用价值。同时，MALDI-TOF MS为复发结核病的耐药性筛查和监测提供了有效手段，可以掌握结核病的流行传播模式和毒株变异。但此技术仍存在一些问题，检测设备昂贵和技术要求高使其在很多结核病防控机构难以推广。另外，现有研究由于样本量小，结果存在偏差，需要对耐药机制和耐药位点进行进一步研究，MTB耐药数据库还有待进一步完善。近一年，具有良好诊断性能的Xper Ultra技术提高了非呼吸道样本MTB检测的敏感度，但仍需警惕假阳性问题，检测结果需要临床结合病史及其他检查综合评估；目前对于NGS检测技术的临床意义还不明确，NGS检测的序列数多少才有诊断价值、检测出哪些病原体才具有临床意义、什么样标本比较可靠等问题，均需要今后进一步大样本多中心的临床研究进行界定；而基于NGS的全基因组测序技术虽然检测成本和所需时间已相对降低和减少，但仍需进一步优化；Truenat技术是种更适合中低收入结核病高流行背景国家的检测技术，相信不久的将来会在我国推广应用；游离DNA检测及MALDI-TOF MS检测等新型结核病检测技术提高了结核病及耐药结核病的敏感度，但仍需要大样本前瞻性研究来明确其诊断结核病的特异度及其临床意义，同时进一步完善MTB耐药数据库，以提高对部分相关耐药基因突变较少药物检测的敏感度。分子生物学检测技术实现了对结核病和耐药结核病的早期快速诊断。但是传统的细菌学诊断方法目前仍然为金标准，不能被完全替代。传统检测方法与分子生物学新技术要根据具体情况以及各自的优势合理选择，不能一味地追求昂贵的技术。部分分子生物学检测技术成本高，使其在中低收入国家及偏远地区应用与推广受到一定的限制，仍需要开发更经济快速的检测方法，分子生物学诊断技术的开发在追求高敏感度和特异度的同时，应考虑其经济可承受性。另外，不少分子生物学方法我们对其了解还不够深入，其临床意义还不够明了，需要开展大样本前瞻性多中心的临床研究，积累更多的数据和资料。只有这样，才能使分子生物学诊断技术更加完善、更加实用、更为价廉，为指导临床有效治疗提供更加有利的依据，期待未来结核病分子生物学诊断取得新的突破。参考文献（略）
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