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三、酯酶染色 酯酶染色法包括：特异性酯酶（SE）染色和非特异性酯酶（NSE）染色。 特异性酯酶（SE）染色：是指氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色。 非特异性酯酶（NSE）染色包括：中性非特异性酯酶（α-醋酸萘酚酯酶）、酸性非特异性酯酶（酸性α-醋酸萘酚酯酶）和碱性非特异性酯酶（α-丁酸萘酚酯酶）。 1.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色 【实验原理】
【操作步骤】 固定：新鲜干燥涂片用甲醛熏蒸5～10min,水洗，晾干。 ↓ 显示：37℃基质液中30min，水洗。 ↓ 复染：苏木素液复染5min，水洗待干。 ↓ 镜检：计数100个白血病细胞，得出阳性率和阳性指数。 【结果判断】 阳性反应为出现红宝石样颗粒定位于细胞质中。
【正常血细胞的染色反应】 阳性主要见于粒细胞系统： 分化好的原始粒细胞：呈弱阳性反应； 早幼粒细胞：出现强阳性反应，但酶活性不随粒细胞的成熟而增强； 嗜酸性粒细胞呈阴性反应； 嗜碱性粒细胞呈阴性或弱阳性反应； 单核细胞呈阴性或弱阳性反应； 肥大细胞呈阳性反应； 巨核细胞、血小板、淋巴细胞和红细胞系统：阴性。 【临床意义】 急性白血病的鉴别： 急粒：原始粒细胞呈阳性或阴性 急性早幼粒：强阳性 急单：阴性 急淋：阴性 急性粒-单：部分+
↑急性粒单细胞白血病，原粒细胞为阳性反应，原幼单核细胞为阴性反应
↑急性单核细胞白血病，原幼单核细胞为阴性反应 2.α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE) 非特异性酯酶又称单核细胞酯酶，凡作用于短链脂肪酸的酶均称为非特异性酯酶。 【实验原理】偶氮偶联法
【操作步骤】 固定：新鲜骨髓涂片置10%甲醛生理盐水中固定5min ↓ 冲洗：流水冲洗5min ↓ 染色：放入37℃基质液中温育lh，水洗 ↓ 复染：10g/L甲基绿水溶液复染5min。 ↓ 镜检：水洗，干后镜检。 氟化钠抑制试验：基质液中加NaF，如果阳性明显减弱表示氟化钠抑制。
↑急性单核细胞白血病原幼单核细胞呈阳性反应（左图），加入氟化钠后明显受抑制（右图）。 【结果判断】 细胞质内有灰黑色或棕黑色沉淀为阳性。 单核系：阳性，可被氟化钠抑制。 【临床应用】 用于鉴别急性白血病的类型 急单：+，能被NaF抑制； 急粒：多数—，少数+，不被NaF抑制。
A：急单强阳性 B：急单加氟化钠后明显受抑制 C：急粒弱阳性 D：急粒加氟化钠后不被抑制 3.α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色 【实验原理】
【临床意义】同α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE) 4.酸性α-醋酸萘酚酯酶染色 临床应用：可粗略鉴别T、B淋巴细胞。T淋巴细胞呈阳性，而B淋巴细胞多呈阴性。因目前淋巴细胞的分类多采用流式细胞仪，故本实验较少用。 四、过碘酸-希夫反应（糖原染色） 糖原是糖在体内的重要贮存形式，是细胞代谢时的能量来源，它在细胞内增多反映细胞生命力旺盛。临床常用的染色方法为过碘酸－希夫（periodic acid Schiff’s）反应，简称PAS反应。 【实验原理】
【正常血细胞的染色反应】 1.粒细胞系 原粒：阴性反应，也可弱阳性。 早幼粒～成熟粒，阳性反应逐渐增强。 嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞：阳性。
2.淋巴细胞系 大多数呈阴性反应，少数为（+）的阳性反应。
3.红细胞系：幼红细胞和红细胞呈阴性反应。 4.巨核细胞系：巨核细胞和血小板染色反应均为阳性。 5.单核细胞：呈阴性或阳性。 6.浆细胞：多为阴性反应，少数为阳性反应。 7.巨噬细胞：可呈阳性反应。
【临床意义】 1. 红细胞疾病 ◇红血病、红白血病、MDS：幼红细胞PAS呈阳性。 ◇巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再障时：幼红细胞PAS为阴性；
↑ 急性红白血病 ↑巨幼细胞性贫血 2.白细胞疾病 （1）鉴别淋巴系统细胞增生的性质 淋巴系统恶性疾病：强阳性 淋巴系统良性疾病：积分正常。
慢性淋巴细胞白血病PAS强阳性（A） 急性淋巴细胞白血病PAS强阳性（B） （2）鉴别白血病类型 急淋为强阳性，急粒为阴性，急单为弱阳性。 3.其它细胞 ◇戈谢细胞强阳性，尼曼-皮克细胞阴性或弱阳性；
戈谢细胞PAS呈阳性反应（箭头所指） ◇霍奇金淋巴瘤的RS细胞阴性或弱阳性； ◇骨髓转移性腺癌细胞强阳性。 五、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP） 1.Kaplow偶氮偶联法 【实验原理】
2.改良Gomori钙-钴法 【实验原理】
【操作步骤】 固定：血片或骨髓片，95%乙醇→5～10 min ↓ 基质液：37℃ 温育4～6h （防蒸发）→水洗 ↓ 硝酸钴：5min →水洗 ↓ 硫化铵：5min →水洗 ↓ 复染: 核固红5min →水洗 ↓ 干后镜检：油镜计数100个成熟粒细胞 【结果判断】 积分判断： 1分：+，胞质中含有少量颗粒或呈弥漫浅色； 2分：++，胞质含有中等量颗粒或呈弥漫着色； 3分：+++，胞质中含有较多颗粒或呈弥漫较深色； 4分：++++，胞质中充满粗大颗粒或呈弥漫深色。
【积分计算】 在油镜下连续观察100个成熟中性粒细胞，计算出阳性细胞所占的百分率，并对所有阳性细胞作出+～++++的分级，百分率乘以级数并相加，即为积分值。
【参考区间】 阳性率：<40% 积分：30 ～ 130分 【临床意义】 1.生理变化 （1）年龄变化：新生儿NAP活性增加。 （2）应激状态：紧张、恐惧、激烈运动等NAP活性增加。 （3）月经周期：经前期增高，行经后降低。 （4）妊娠期：NAP积分增加。 2.病理变化 NAP活性增高：细菌性感染、类白血病反应、再障、骨髓纤维化、真性红细胞增多症、恶性肿瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病急性变等。 NAP活性减低：慢性粒细胞白血病、PNH、MDS、恶性组织细胞病等。 3.疾病的鉴别 （1）慢性粒细胞白血病与类白血病反应的鉴别：前者NAP积分明显下降，常为0 分，后者明显增加。
↑ 慢性粒细胞白血病NAP积分明显下降
↑ 类白血病反应NAP积分明显增高 （2）再生障碍性贫血与阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）：前者NAP增加，后者下降。
↑ PNH积分降低 ↑ 再障增加 （3）急性白血病类型的鉴别：急粒常下降，急淋常增加，急单一般正常或减低。
↑ 急粒积分降低 ↑ 急淋积分增加 六、酸性磷酸酶染色（ACP） 【实验原理】
【正常血细胞的染色反应】 粒细胞 、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、巨噬细胞为阳性。 【临床意义】 1、诊断多毛细胞白血病： 多毛细胞白血病ACP呈阳性反应，不被L-酒石酸抑制。慢性淋巴细胞白血病的淋巴细胞、恶性淋巴瘤细胞也可呈阳性，但可被L-酒石酸抑制。
↑ 淋巴细胞白血病细胞胞质呈橘红色阳性反应
↑ 多毛细胞白血病ACP呈阳性反应，不被L-酒石酸抑制 2、鉴别戈谢细胞和尼曼—皮克细胞：前者阳性，后者阴性。 测试题 A1型选择题： 1、碱性磷酸酶主要存在于（ ） A、幼红细胞 B、单核细胞 C、成熟中性粒细胞 D、嗜碱性粒细胞 E、淋巴细胞 2、非特异性酯酶染色阳性，加氟化钠明显抑制，见于下列哪种疾病（ ） A.急性淋巴细胞白血病 B.急性单核细胞白血病 C.急性粒细胞白血病 D.急性红白血病 E.巨核细胞白血病 3、最适宜用于鉴别原粒和原淋的细胞化学染色是（ ） A.PAS B.ACP C.ɑ-NBE D.NAP E.POX 4、抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的是（ ） A.慢性淋巴细胞白血病 B.淋巴肉瘤 C.多毛细胞白血病 D.尼曼-匹克病 E.B淋巴细胞 5、为了区别红白血病与巨幼细胞性贫血，下列首选试验是（ ） A.ACP染色 B.PAS染色 C.α－NAE染色 D.NAP积分测定 E.POX染色 6、最适宜用来鉴别慢性粒细胞白血病与类白血病反应的细胞化学染色是（ ）。 A.过氧化物酶 B.糖原 C.酸性磷酸酶 D.碱性磷酸酶 E.血清溶菌酶 7、铁染色常用于下列哪种疾病的诊断（ ） A.巨幼细胞性贫血铁粒幼细胞性贫血 B.慢性疾病性贫血 C.缺铁性贫血 D.骨髓增生异常综合征 E.溶血性贫血 8、判断骨髓外铁，需要观察（ ） A.中幼红细胞 B.晚幼红细胞 C.网织红细胞 D.骨髓小粒 E.红细胞 9、正常人细胞外铁是（ ） A.（+）～（++） B.（++）～（+++） C.（+）～（+） D. I型为主 E. II型为主 10、伴环形铁粒幼红细胞增多的难治性贫血， 环形铁粒幼红细胞至少占有核红细胞的（ ） A.15% B.20% C.25% D.30% E.35% 答案： 1. D 2.B 3.E 4.C 5. B 6.D 7.C 8.D 9. A 10.A ——End—— |
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