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单细胞表面蛋白组（single cell surface proteome）是在单个细胞的水平对细胞表面蛋白进行检测的一项新技术，也是针对单个细胞研究其表面蛋白水平的实验方法。逆耳生物公司提供基于10X Genomics公司的单细胞表面蛋白组的技术提供科技服务，一方面可以检测单细胞的表面蛋白的数量，同时也可以检测相应的单细胞的转录组的表达情况。 一、工作原理 10X Genomics的单细胞表面蛋白组是在单细胞转录组技术基础上增加了对细胞表面蛋白的检测来实现的。具体的实现过程是用连了DNA标签链的特定抗体对细胞表面的目标蛋白进行标记，并在建库和测序过程中，把这些DNA标记转化成测序结果，最后进行数据分析。
用于做单细胞表面蛋白组的凝胶微珠（Gel bead）比起单纯做单细胞转录组的凝胶微珠，在连接了标准的标签链之外，还连接了另外两种标签链。这两种标签链的3’末端分别连了Capture Seq 1和Capture Seq 2序列。这两种标签链的作用，是可以用于捕获研究者感兴趣的研究目标，例如：目标蛋白。
用10X Genomics公司的Chromium把分散成单细胞的悬液与凝胶微珠通过微流控，与油相混合在一起，形成油包水的小微滴。 微珠上的Capture Seq 1的标签链会与细胞表面结合的抗体上的标签链互补结合。接下来在聚合酶的作用下，标签链延伸连上抗体上的Feature Barcode序列。后续这个包含了10x Barcode、UMI、Feature Barcode三种特征序列的测序结果，就可以作为生物信息分析的原始测序数据。
接下来把细胞膜破掉，让细胞当中的mRNA游离出来。游离出来的mRNA与小液滴中的水相混合，也就与水相中的逆转录酶、结合在凝胶微珠上的核酸标签链引物、以及dNTP底物相接触。接着，发生逆转录反应。mRNA与凝胶微珠上带标签的DNA引物链相结合，在逆转录酶的作用下，逆转录出cDNA来。
把这个乳浊液当中所有的水相抽出来，也就是把所有带抗体标签的DNA链，和带了标签的cDNA分子都抽出来，再把这些cDNA分子都加上接头，经过PCR扩增，做成illumina的测序文库，放到Illumina的测序仪上进行测序。测序完成之后，进行数据分析。
二、技术亮点 1、 本方案与全细胞和细胞核兼容 2、 与靶向基因表达兼容 3、 简单易用的数据分析和可视化软件 4、 采用测序行业标准的双索引建库策略，最大程度地提升测序结果可靠性 |
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