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笔者至今还记得，刚毕业初入药研圈，第一次亲密接触方法学验证，忍不住翻着白眼感叹：强制降解，它到底咋做，这到底是一种什么神仙试验？ 不禁想起诗人席勒的一声叹息——“德意志？它在哪里？我找不到那块地方。” 带着直击面门的疑问，研发一做就是十来年，试验由浅入深，从模仿和遵守，到理解和变通。现从以下几个方面，带新手上路。而针对强制降解试验，业内多年来本就讨论纷纭，但求本次深入浅出——未尽之处，感谢各位看官谅解。
一、强制降解试验的意图 强制降解试验（stressing test），也称为破坏试验，本质上隶属于专属性考察。它是在人为设定的特殊条件（强光照射、高温、高湿、酸、碱水解及氧化等条件）下，研究可能存在的降解产物和降解途径对杂质测定的影响，并对主成分进行色谱峰纯度的检查，以证明主成分色谱峰中不包含其他成分的降解杂质。 参考阅读：《化学药物杂质研究的技术指导原则》 强制降解试验目的：考察色谱条件的分离能力、样品的可能降解途径和样品的稳定性。 试验前先要想：我做的这个试验是为了什么？
当然，降解对象相同，即使强制降解试验有时难以精准重复，即使存在样品浓度和色谱条件不同的情况，有关物质与含量测定的降解结果仍然存在一定的关联性，同样敬请关注。 二、强制降解试验条件和程度 相信每一名试验者，在设计方案之前都曾托腮冥想过：我到底要选择怎样的降解条件才合适？ 问问题之前，也请同学们先问自己，对所研究的原料、辅料、制剂到底有怎样的了解。是否像关注爱豆一样对它们有所研究和查询—— 原料的化学结构中有没有不稳定基团？在哪些条件下可能发生反应？辅料和工艺是否对主成分有这样那样的影响？
上面这些都了解了，就尽情开始你的表演吧~~ 注意降解后的主成分峰尽量不低于80%，如果太过剧烈，极容易产生二次降解——你白云大妈都不是你大妈了，你黑土大爷也很难还是你大爷，检出的降解产物若难以控制在研究范围内，那么降解途径和机理也都免谈。 在最后的最后，如果，条件已经足够剧烈，仍然没有降解出任何东西，色谱图平坦成一条线，那么别执念了，就放开那个样品，把序列走上，欢乐地出门吃个火锅吧。 现将推荐的极限条件大概总结如下供大家参考，具体试验过程中还需要针对品种灵活变通：
三、试验中其他应关注事项
四、强制降解试验的结果分析 降解试验结果有如下要求： （1）供试品降解溶液中，主峰与各杂质峰之间分离良好，主峰峰纯度合格；尽可能确保已知杂质之间、已知杂质与未知杂质之间分离良好（针对含量测定，仅要求杂质与主峰间的分离度良好）。 为能带给新手一个感性认识，截取一张图谱如下，图谱上明确出图该有的各项信息，包括分离度和主峰纯度等要求。 注：峰纯度指数大于950时，即为主峰纯度合格。不同色谱工作站对峰纯度的体现形式不同，需遇具体情况时再具体分析。 （2）供试品降解溶液需满足质量守恒（针对含量测定，不做此要求），质量守恒指数要求在0.90~1.10之间，可按校正因子将峰面积折算后进行计算。 注：守恒指数为各破坏条件下“总峰面积/称样量”值与未破坏样品“总峰面积/称样量”值的比值 （3）有明显的降解产物时，若为已知杂质，需分析其降解机理；若为未知杂质，需进行定性分析（如LC-MS等）。 （4）在比较降解试验结果时，原料药、自制品、市售品在相同的降解条件下的降解趋势、降解程度应基本一致；如不一致需查找并说明原因。 言尽于此，希望对新手小朋友们有所帮助。 变成熟的标志就是，以前屁大点事就多愁善感，现在即便千山万水，单枪匹马也可以应付得来。毕竟对实验者们来说，最好的祝愿就是： 祝大家实验顺利！ 结束语 笔者远不是咖，忙碌小半生只是个药学事业中勤勤恳恳的小螺丝钉。母校沈阳药科大学录取通知书有教诲：“愿你们奋拓药源，恪守药德，为祖国医药事业和人类身心健康奋斗终生。”
而立之年今日所愿——惟职业生涯能尽绵薄之力，让几个品种能够服务受众，让发我工资的企业有所收益，带一个组热热闹闹恩恩爱爱，护几个孩子的成长之路精彩奋进积极向上，仅此而已。 ———基督山海棠 2019.07 参考文献： 《化学药物杂质研究的技术指导原则》 《ICH 新原料药和制剂的稳定性试验 Q1A（R2）》 |
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