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知识点009:标本乳糜对检验结果的影响

 文进玲玉 2023-07-03 发布于江苏

写在前面:

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血液标本的状态对检验结果的影响是十分严重的,常见的影响因素为标本溶血、标本乳糜和标本黄疸。今天就说说标本乳糜的事,仅供参考。



第一部分:标本乳糜是什么?

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标本乳糜是一种状态,正常标本(自然凝固或分离胶促凝)分离血清后血清是淡黄色透明(如下左图),当离心后出现浑浊或者乳白色的血清这个状态叫做乳糜(随着严重的程度,乳白色越来越重,如下右图),有的单位称为脂血(脂血与乳糜血还是有区别的)或者牛奶血(俗称)。其主要成分是胆固醇、脂蛋白、甘油三酯(需要参考生物化学的结果)。

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第二部分:标本乳糜对结果的影响

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标本乳糜对于整个实验室的项目都会有一定影响,无论是临床基础检验的项目,还是生化免疫(对于免疫项目的影响是不定的)的项目。其中对于生物化学的项目影响最大,对免疫项目的影响最复杂,对临床基础检验项目的影响是最隐蔽的(看过上三个文字可以看出,标本状态上对于生化的影响是最明显的,其原因主要是方法学的问题,比色和比浊法都会受到颜色和浊度的变化的影响,而临床基础检验很多是计数的或者磁珠法、物理法,影响相对较小较隐蔽,而免疫反应是抗原抗体反应,相对而言比较特异,受到状态的影响较生化反应小)。

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2.1标本乳糜对临床基础检验项目的影响

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2.1.1标本乳糜对血常规的影响

在血常规检测中血小板易受到乳糜颗粒的影响,当乳糜颗粒在7-9fL时会使仪器误认为血小板,从而使血小板结果假性升高。乳糜血中的微粒增加了血液中的浊度,会使得Hb检测结果假性升高,造成RBC与HGB的比例失调,导致MCV,MCH,MCHC等结果出现异常。此外乳糜还会对有些仪器的某些通道(如BASO通道)有所影响,使得白细胞结果也会出现不稳定的现象(SYSMEX XN仪器会给出相应报警信息)。

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司南说:对于乳糜标本的识别,在血常规检测上是很隐秘的,我们可以根据散点图的异常(如下图的WNR通道的异常散点)、数值的不合理组合(RBC、MCHC、MCV等)或者仪器给出的提示(标本乳糜)信息进行判断,对于乳糜标本,最常用的解决方式是血浆置换(具体置换方式略),此外可以用一个修正公式进行修正(修正公式如在说明1,修正效果与血浆置换类似)。因此,在审核血常规时需要注意散点图的查看和不合理数值的分析(MCHC一个很重要而特殊的指标)。

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说明1:修正公式:标本上机检测,得到HGB校正前、HCT校正前等参数,再将样本低速离心310-550g,2-3min,取出吸出脂血浆,再将脂血浆进行全细胞计数,检测出脂血浆中的HGB浓度(HGB脂血血浆)。

计算公式为:

HGB校正值=HGB校正前-HGB脂血血浆(1-HCT校正前)

MCH校正值=HGB校正值/RBC校正前

MCHC校正值=HGB校正值/HCT校正前

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2.1.2标本乳糜对凝血项目的影响

乳糜标本对凝血的影响,第一个想到的就是对Fg的影响(重度乳糜,只能用一句话形容,真做不出来啊,光学法受重度乳糜影响非常大,一个研究显示TG>6.4mmol/L的时候Fg就可能测不出来了),标本乳糜对血凝影响到另外一个是PT,会引起其结果偏高(一个研究显示TG>15.2mmol/L时会影响到PT的结果)。此外,标本乳糜会影响到D-二聚体的检测(免疫比浊法的项目一般都会受到引起浊度变化的乳糜的影响),会使得其结果出现异常或测定不出(说明书上有具体的数值)。

司南说:对于血凝的影响,其实还算容易,毕竟是离心以后的标本,在上机前就会有一个预判,乳糜的程度上大致可以判断是不是需要高速离心,对于不是很明显的可以看一下仪器上的乳糜指数,然后看说明书上面的影响和反应曲线去判断对结果的影响有多大。回报时候如果进行高速离心操作,那么备注告诉离心后以便于临床医师判断结果。当然有磁珠法的影响会小一些或者无影响。

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2.1.3标本乳糜度血流变的影响

标本乳糜对血流变影响是巨大的,而且这也是血流变检测异常的一个原因,通俗讲乳糜的原因就是血脂过高,血脂过高就会引起黏度的变化(血流变也叫血粘度或者中风预报),其检测值会远高于正常患者。

司南说:对于血流变其实想说的很多,但说的也不会太多,项目的好坏在于怎么运用。笔者认为标本乳糜的血流变结果备注标本乳糜就够了。

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2.2标本乳糜对生物化学和免疫学项目的影响

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生化项目是受到标本乳影响最大的,生化反应基本上都是比色法和比浊法。标本乳糜的乳白色基本上就是乳糜颗粒和极低密度脂蛋白引起,其对光有一定的散射作用,会使得本底过高,干扰光学检测。对单试剂终点法的项目容易引起增高影响(葡萄糖氧化酶法,主波长在500至600尤为严重),而对TBIL、DBIL形成负干扰,极容易出现负值或者结果严重偏低。而对ALT、AST、GGT、ALP等速率法的项目形成的干扰,主要在于反应曲线的上浮,仪器容易回报吸光度错误,无法出值。对于免疫比浊法的项目由于标本乳糜本身浊度问题,使得结果准确度大大降低(甚至出现负值的现象)。此外对于离子选择电极法测定离子也会有一定的影响(脂蛋白占位效益,后面再说)。

免疫项目的影响一部分来源于免疫比浊法的类似影响光学影响,一部分是由于乳糜标本的血清粘度加大及乳糜微粒的屏蔽效应,可以减少抗原抗体结合的几率,从而对免疫比浊法产生一定的影响。需要注意的是,标本乳糜对于免疫项目的影响类似于“随机”的影响(乳糜颗粒非均一性,对某些免疫反应影响未知),因此对于乳糜的标本做出来的结果需要认真审视(包括打电话问临床医师或者打开病志系统看看患者的病程变化)。

重点说明:乳糜标本对离子(离子选择电极法-间接法)的影响

临床中常见的离子检测方法为离子选择电极法,其中间接法被应用的很广泛,其原理是将样本进行一定比例的稀释后再测定离子浓度。一般情况下,血清中水占总体积的比例是稳定的,约为 93%(含有钾钠氯离子),剩余的 7%(不含钾钠氯离子)为蛋白质、脂类等。当样本中含有大量不溶于水的脂类物质时,水的体积被脂蛋白挤占,其所占比例降低,而仪器稀释的比例和默认的水占体积未变,这就导致间接法检测离子时会导致假性降低(这是一个很隐秘的实验室结果假阴性的原因,因此需要实验室工作人员注意不符合临床的离子结果)。


第三部分:临床常见问题

3.1实验室怎么发现乳糜?

相对于溶血、黄疸的判断,乳糜的标本更容易,离心以后直接观察就可以看出是否乳糜。

3.1.1乳糜比色卡

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3.1.2自动化仪器的乳糜指数:现在的全自动生化、免疫、血凝等仪器都会给出H、I、L值,可以给出相对一个定量的乳糜指数的结果,对比说明书就可以知道乳糜对该项目是不是有实际意义的影响(有的仪器会通过指数提示相关项目需要人工干预)。因此,对于有相关系数的实验室建议打开这几个指标(相对于人工,仪器给出的指标更加客观)。

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3.2乳糜的标本怎么处理?

仪器厂家(试剂厂家)试剂实验室都会把相关影响因素写入说明书(下图是罗氏直接胆红素说明书检验结果的解释部分),当L值小于750时认为对DBIL项目没有影响。

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对于乳糜标本的处理,我们可以

3.2.1选择抗干扰性更好的方法学或仪器,或者对仪器的参数进行必要的调整。如一点终点法的项目,可以设置样本空白的参数。一点终点法的试剂可以替换为两点终点法(特别是双试剂两点终点法)的试剂,由于有副波长会抵消一部分乳糜的光学干扰。速率法对乳糜样本也有一定的抗干扰能力。通过选择合适的双波长(更改检测光的频率)可以消除乳糜对检测结果的影响,但是设置时要求被测样本在测定波长、辅助波长处有相同的吸光度(对于原厂的试剂参数还是不要轻易去更改的,容易引起其他的不必要的麻烦,笔者建议用其他的方式去排除乳糜的干扰)。

3.2.2干式生物化学法去复查,干化学对于乳糜的影响由于设计的问题干扰性更强,可以把干扰项目比较严重的在干化学仪器上进行复查(前提是您的实验室要有干化学仪器)。

3.2.3选择稀释的方式对某些项目进行复检(稀释倍数不是无限的,稀释倍数越高误差越大),这个也是常用的方法之一,一般对于重度乳糜的标本,胆固醇和甘油三酯需要稀释复查。

3.2.4乙醚抽提法:可减少或排除脂血对ALT、AST和TP等检验指标造成的干扰,却不能排除对ALB、GGT、LDH、BUN、GLU、Ca等指标的干扰。并且引入外源物质可能会对有些项目的测定产生影响,现已少用。(体系引入外源物质的方法还是慎重)。

3.2.5沉淀分离法:该方法在样本中加入了附加成分,改变了反应体系,不仅操作繁琐且只能测定部分生化项目,有一定的局限性(引入外源性物质的方法都需要慎重)。

3.2.6血清静置实验:将乳糜血标本静置于4℃冰箱16-24h后观察其浑浊程度。Ⅰ型高脂血症的血清分成两层,吸取下层血清(没有实际意义,耽误时间,并且效果也不好)。

3.2.7高速离心法:CLSI推荐的方法,也是常用的方法,高速离心法对于乳糜颗粒引起的标本乳糜效果还算理想,对于极低密度脂蛋白引起的标本乳糜效果欠佳(有时候需要离心多次才能做出相对理想的结果)。高速离心一般选择13000转左右,10-20min,离心后取下层淡黄色透明血清上机检测,有时候需要离心很多次才可能离出透明血清(轻度乳糜也可以接受)。

司南说:对于乳糜标本常用的还是稀释法和高速离心法更加适合临床,以稀释法做TG和TC,用高速离心法做其他项目,相对而言还算合理。但是,无论什么方法都要备注上标本乳糜,结果仅供参考的标识(建议备注上写上标本乳糜的解释,如哪个项目影响较大等)。如果有干式生化,也可以用干式生化去复查重度乳糜的标本。

 3.3乳糜标本是否需要拒收?

对于乳糜的标本笔者不建议拒收,如果严重影响到了结果,建议联系临床医师(解释异常结果的原因以及可能影响到的临床处理)并备注(提醒意义,备注不要只备注乳糜标本,建议备注对哪些项目有影响以及影响到程度)。乳糜常见的原因中很多是饮食引起的,可以与患者和医师联系确认是否是饮食影响,是否非紧急情况,这样的标本可以拒收(并告知素食若干天后再复查)。而对于疾病引起的乳糜(胰腺炎、脂肪乳输注的危重患者)需要让步检验,医师诊断患者的病情需要某些指标进行判断(某些指标可能不受乳糜影响或者我们有办法使得影响降到最低)。

3.4乳糜血和脂血的区别?

最后解释一个概念,乳糜血和脂血是区别的。乳糜血一般是由患者淋巴管阻塞、脂类代谢异常、接受脂肪乳治疗等因素造成。患者摄入大量高脂肪类食物后,造成血中脂肪暂时升高,出现脂血样本。两种样本经过离心后,乳糜血血浆呈现明显的乳白色,脂血血浆无明显改变。另外将乳糜血和脂血标本制成血涂片,看看血片上的细胞分布情况。乳糜血标本的血涂片上未出现任何改变,而脂血标本制的血片,可见细胞分布不均,出现大小不等的空洞现象。

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司南说:

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标本乳糜是很常见的一个影响结果的因素。当遇到乳糜标本时,首先要与临床医师进行沟通,如果是非急症或者饮食引起的原因可以拒收标本(给出建议并定期复查),对于无法拒收的标本可以进行让步检验,轻度的乳糜一般不会影响到结果,中重度的乳糜尝试稀释后无果可采取高速离心的方法,做出来的结果加以备注提示即可发出报告(需要与临床医师进行沟通,特别是重度乳糜或者重症患者)。我们检验人工作的目的就是给临床一个真实的患者的结果,因此,要有如侦探的眼光和头脑去工作和分析结果,检以求真,验以正德!


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