□编译整理：张福志山东上期补充： B淋巴细胞免疫组化标记抗体 B淋巴细胞是淋巴滤泡与髓索区的主要组成细胞。但T区亦有少量B淋巴细胞，当淋巴细胞增生则发生改变，而且不同抗体对B细胞不同分化阶段的标记阳性也是不一样的，且有特异性的差别。常用的B细胞标记抗体如下： (1 ) CD20这是最常用的敏感性标记，胞膜阳性，但B淋巴母细胞与浆细胞阴性。偶尔T细胞也可阳性。 (2 ) CD79a为对B淋巴母细胞和成熟B细胞及浆细胞全阳性的抗体，但滤泡生发中心B细胞着色较弱。 (3 ) PAX-5为核标记阳性全B细胞特异性抗体，但浆细胞阴性。 (4) CD10. BCL6标记生发中心B细胞和辅助T细胞阳性。 (5) CD19、CD22、CD74也为全B细胞标记抗体，但不常用。 (6 ) CD138、CD38为浆细胞标记抗体,CD138特异性强但染色阳性率 低，CD38易表达，但特异性较差。另外rnuml. BOB1、OCT-2也可阳性。 为了一次性将B细胞转化全程标记，可采用CD20、CD79a、PAX-5三种抗体同时配套应用。 一、免疫组织化学在淋巴组织增生病变病理诊断中的正确应用 免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）,简称免疫组化。它是特定的抗体与特定的抗原相结合原理检测淋巴组织不同组成细胞不同类型的标记物］目前IHC已成为淋巴组织增生病变诊断与鉴别诊断必不可缺少的检测辅助手段。至今已制成国际通用的CD（clusters of differentiation）系列抗体247种和其他非CD系列抗体若干种，如S-100、cyclinD1 melanA、TdT、LCA、CK等。 绝大多数抗体均可以用于石蜡切片组织标记。方法较简单，易于操作，成本较低，便于推广应用。 总的抗体可分为多克隆型与单克隆型两种。前者较广谱，特异性较差，而后者特异性较好，制作较复杂，成本高。IHC标记应用中尚存在敏感性与特异性不足的问题。阳性的价值要比阴性的价值高。因为抗体质量、操作错误等导致假阴性的机会比假阳性的多。 IHC检测时要求每片均要设阳性对照，保证标记结果的准确性。目前应用IHC仪操作，可以出现对照组织阳性而待检标本为阴性，这是机器操作失误之故。 1.应用范围 （1）淋巴组织增生病变良恶性鉴别诊断。 （2）淋巴瘤的组织学分型。 （3）淋巴瘤与其他小细胞肿瘤鉴别诊断。 （4）淋巴瘤靶向治疗的依据，例如CD20阳性淋巴瘤可应用美罗华靶向治疗。 2.正确应用免疫组化标记 （1）应用优质的待检组织学切片在充分固定的基础上，切成4μm以下的薄切片，保证单层细胞，防止厚切片、细胞重叠，切忌刀痕等现象影响IHC的效果。 （2）IHC操作要认真规范进行 其中抗原修复要按抗体的不同对应抗原修 复方法，每片设阳性对照。 （3）抗体的合理配伍要明确各种抗体的特异性、敏感度及广谱性，要取长补短，同类抗体应两种以上搭配达到满意的效果。例如B淋巴细胞标记抗体的配伍，CD20敏感性较好，但少数T细胞可阳性，B淋巴母细胞、浆细胞阴性。CD79a为B淋巴母细胞、浆细胞均可阳性的全B细胞标记抗体，但对生发中心B细胞较弱。PAX-5核阳性，特异性强的B细胞抗体，B淋巴母细胞亦阳性，而浆细胞阴性。这3种抗体联合作为B细胞淋巴瘤标记抗体最全面有效。PAX-5对HRS细胞弱阳性，ALCL瘤细胞阴性，故可作为两者的鉴别诊断。如果应用单一抗体就会引起漏诊，或是为了弥补漏诊需2〜3次才能完成诊断，此延误诊断。 T细胞标记抗体常用的有CD3ε胞质型，对T细胞高度敏感与特异性，但对＜10%T细胞不表达，CD45Ro 80%〜90%外周T细胞淋巴瘤阳性，有些T细胞淋巴瘤CD3阴性而CD45Ro阳性。但T淋巴母细胞淋巴瘤常阴性，组织细胞与髓细胞也可阳性，＞5%的B细胞淋巴瘤（尤其是大B细胞淋巴瘤）阳性。CD43（MT1、Leu22、DFT1）对T细胞高度敏感（有些T淋巴瘤CD45Ro阴性而CD43阳性），但特异性差。部分B细胞（尤其是EBV感染时）、组织细胞及髓细胞、小B细胞淋巴瘤亦可阳性表达。因此T细胞标记抗体配伍常用CD3与CD45Ro或CD43搭配。 （4）常规应用的套餐抗体配伍 根据作者多年的淋巴组织增生病变标记抗体的应用经验，推荐以下常规抗体套餐项目：CD20、CD79a、PAX-5、CD3、CD45Ro（或CD43）、CD21、Ki67、CD163这8项作为常规不可少的套餐，其他根据组织学特点指向性增加项目。上述套餐的配伍依据除了前述B细胞与T细胞的抗体的配伍以外，CD21是滤泡树突细胞标记抗体（偶尔可标记生发中心B细胞）。它把滤泡内树突细胞网（FDC网）标出，可识别淋巴滤泡正常或是受到淋巴瘤细胞侵蚀破坏状况。这对淋巴组织增生病变良恶性鉴别具有较好的参考作用。而且在血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤的免疫表型中出现的滤泡外围血管FDC增生网具有诊断的特征性。Ki67 (MIB1 )：为一细胞增殖指数标记，它表达于所有细胞的细胞增殖指数。高表达于滤泡生发中心增生，其表达指数与其细胞增殖率同步。故良性增生除生发中心外均较低，而淋巴瘤Ki-67增殖指数高低与恶性高低呈正相关。Burkitt淋巴瘤其增殖指数为100%。 Ki67表达的模式在滤泡性淋巴瘤与滤泡增生的鉴别诊断有意义。CD163为组织细胞标记抗体，特异性与敏感性均较CD68好。将它加入套餐中，可以将反应性增生淋巴结窦内与生发中心中组织细胞和组织细胞淋巴瘤及其他淋巴瘤中反应性组织细胞标出，避免漏诊断。 (5)假阳性与假阴性的识别 ①组织边缘或坏死区着色常为假阳性。 ②染色定位不准确被视为假阳性。如S-100核浆着色而核膜不着色，若单纯膜阳性，则为假阳性。 ③阳性对照阳性而切片阴性或全切片全阴性为假阴性，因为100%为单一型细胞是没有的。 （6）染色定位的正确识别 免疫组化染色各种抗体表达于细胞的定位均有一定类型，如果染色定位不准确，则视为染色失败或假阳性。 （7）正确识别抗体标记是瘤细胞还是反应性细胞真正的淋巴瘤除瘤细胞以外尚有不定量的反应性细胞，如成熟的T细胞、B细胞、组织细胞及粒细胞等有的淋巴瘤反应性细胞占优势。因此每项抗体标记阳性表达在瘤细胞还是反应性细胞的识别，十分重要。如果搞错，就会导致误诊，后果十分严重。一般瘤细胞占优势，具有不同程度的异型性，如体积大、核膜厚、染色质粗、核仁明显等，而反应性细胞为成熟性小淋巴细胞或组织细胞。有时少数B淋巴瘤病例瘤细胞与反应性T细胞数量接近，如CD20与CD45Ro或CD43之间数量近似，如同时做PAX-5标记，其特异性强，弥漫多数阳性，支持B细胞淋巴瘤。如少数阳性则可能为T细胞淋巴瘤。绝不能T细胞与B细胞标记阳性占多数者则定为淋巴瘤类型。因为某些淋巴瘤瘤细胞只占少数，反应性细胞占明显优势。例如富于T细胞/组织细胞性大B细胞淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿、淋巴组织细胞性间变性大细胞淋巴瘤等。 （8）全面了解每种抗体的非特异性表达与异常表达 几乎没有一种抗体是100%特异，往往开始应用特异性强，应用多了就显示出非特异性，例如TdT被认为只有在淋巴母细胞淋巴瘤阳性。后来发现上呼吸消化道淋巴组织增生、Castleman病、某些淋巴瘤、肝细胞癌、腺泡细胞癌等均可出现TdT阳性的惰性淋巴母细胞反应性浸润。另外Cyclin D1抗体认为是套细胞淋巴瘤的特异性抗体。后来发现在惰性小淋巴细胞淋巴瘤、浆细胞瘤、毛细胞白血病也可表达。 最近有报道，中心母细胞性大B细胞淋巴瘤也可阳性。CD45Ro、CD43为T细胞标记抗体，但对组织细胞、髓细胞亦可阳性。 CD30抗体除HRS细胞与间变性大细胞淋巴瘤阳性以外，活化T淋巴细胞或B淋巴细胞、胚胎性癌及少数未分化癌亦可阳性。HRS、CD15同时可阳性，其余的多数CD15阴性。 PAX-5 HRS细胞弱阳性，ALCL多数阴性，但最近已有报道少数ALCL亦可阳性。 CD5与CD43在套细胞淋巴瘤可异常表达。 CD5与CD23可在慢性淋巴细胞白血病异常表达。 CK与EMA上皮性标记性抗体在少数淋巴瘤中亦可阳性。 以上所述提醒我们病理工作者要全面了解，以防误诊。 二、免疫组化色淋巴组织增生病变良恶性鉴别诊断中的应用 (1)从淋巴结免疫表型模式鉴别良恶性 ①增生性淋巴滤泡(LF)免疫表型模式，CD20标记LF为圆形或卵圆形，亦可见不规则形，周界较清楚，LF间少量阳性。CD79a标记外形与CD20标记相同，但生发中心(GC)区着色较弱。 CD10与BCL6标记均为GC阳性与套区之间分界很清楚。BCL6可在T区有少许散在阳性细胞，而CD10几乎没有。Ki67标记在GC高表达，有时可见极性。 LF间区可见5%~10%阳性细胞散在。 CD21标记LF以GC为主的FDC网，周界清楚，网格较整齐。 BCL2标记GC阴性，周界十分清楚，套区与T区均为阳性。以上IHC标记表型均体现了 LF的正常结构完整无破坏。 ②增生T区免疫表型模式CD3标记T区多数细胞阳性，LF生发中心并有少数阳性细胞，其CD4、CD57、PD-1、CXCL13均可阳性，为GC辅助T细胞。 CD163为组织细胞标记，T区GC有少量阳性细胞，而淋巴窦内有较多阳性细胞。S-100标记T区可见散在指状突树突细胞(IDC)，有许多树枝状突起，形似脑胞胶质细胞。 以上为增生性淋巴结免疫表型模式。这里特别强调的是免疫表型模式。它体现了淋巴结的良性增生，其具有量的增多，如淋巴滤泡增生或T区增生，而无质的改变和正常结构的破坏。其中LF的免疫表型模式的有无破坏对淋巴组织增生病变的良恶性鉴别具有重要意义。如果LF失去正常免疫表型模式，套区消失、密集、相互融合，BCL2阳性，CD10与BC6阳性细胞向结节间浸润，这就是滤泡性淋巴瘤。3级滤泡性淋巴瘤瘤结节可以BCL2阴性，但其阴性区周界模糊不清。又如GC外套区、边缘区、T区淋巴瘤FDC网可以不同程度地受到植入性破坏，或是GC细胞产生的淋巴瘤则FDC网可以发生爆裂性破坏。增生淋巴结免疫表型模式部分或全部破坏消失，另外GC萎缩滤泡BCL2阳性不能误为滤泡淋巴瘤。 ③异常的免疫表型T细胞标记抗体CD5、CD43异常表达于套细胞淋巴瘤，CD5、CD23异常表达于慢性淋巴细胞性白血病。 CD4与CD8共表达或共阴可能为T细胞淋巴瘤。 CD2、CD5、CD7同时丢失可能为T细胞淋巴瘤。 ④Kappa，lambda单项表达应用于鉴别浆细胞瘤与浆细胞性炎比较有效一般要两者10：1以上才有效。 （2）淋巴瘤分型常用抗体（除常规套餐抗体以外）套餐 ①T淋巴细胞或B淋巴细胞淋巴瘤：未成熟型（母细胞性）TdT、CD99、CD1a、T：CD3、CD45Ro、CD2、PAX-5；成熟型B：CD20、CD79a、PAX-5、CD3、CD45Ro/CD43。 ②NK/T淋巴瘤：CD3、CD56、TIA-1、perforin、CrB、EBV（LMP1或EBER原位杂交） ③间变性大细胞淋巴瘤：CD3、CD30、ALK、PAX-5。 ④浆细胞瘤：CD38、CD138 ⑤套细胞淋巴瘤：CyclinD-1、CD5、CD43、SOX11。 ⑥血管免疫母细胞T淋巴瘤：CD4、CD45Ro、CD21、CXCL13、CD10、BCL6、PD1。 ⑦滤泡性淋巴瘤：CD10、BCL2、CD21、BCL6。 ⑧边缘区B细胞淋巴瘤：BCL2、CK、CD21、Ki67、CD10。 ⑨Burkitt淋巴瘤：CD10、BCL6、Ki67、BCL2、Myc ⑩霍奇金淋巴瘤：CD30、CD15、PAX-5、LMP1。 ⑪组织细胞肉瘤：CD68、CD163。 ⑫树突细胞肉瘤：CD21/CD23/CD35、S-100(IDCS)、CD68。 ⑬朗格汉斯细胞：S-100、CD1a、Langerin。 ⑭细胞毒标记：TIA-1、perforin、GrB。 |
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