【免疫组化】免疫组化在淋巴瘤诊断中的应用

免疫组化在淋巴瘤诊断中的应用范围

      免疫组化( immunohistochemistry, IHC )标记已成为淋巴瘤病理诊断中不可缺少的辅助技术之一(淋巴瘤病理诊断的要素主要包括:临床表现、病理组织学、免疫组化、分子遗传学)。其应用范围包括：

      ▲主要用于淋巴瘤的分型。

      ▲淋巴瘤与其他小圆细胞肿瘤的鉴别。

      ▲淋巴瘤与淋巴组织增生病变鉴别(即良恶性鉴别)。

     

       ▲辅助淋巴瘤分期和预后提示。

      ▲为淋巴瘤靶向治疗提供依据，如CD20阳性应用于美乐华治疗。

如何正确应用免疫组化标记

      ▲提供优质的组织切片，这是最基础的条件。

      ▲充分固定：淋巴组织切成薄片(<0.3cm) ，10%中性福尔马林液固定(固定液与标本体积比为10: 1)，忌用95%乙醇。

      ▲应多梯度延长脱水时间，最好与常规外检组织分开进行。

      ▲<5 um薄切片,无刀痕，染色清晰。

抗体的选择

      认真观察HE组织切片，预定筛选淋巴瘤的可能性。

     若初步判断为淋巴瘤则选用CD45，CD20，CD3

     若为小细胞癌则选用CK, CgA, Syn。

淋巴瘤分型常用抗体

      ▲T淋巴细胞或B淋巴细胞淋巴瘤:

      ( 1 )未成熟型(母细胞性) : TdT, B-LBL加CD79a， PAX5, T-CD3ε， CD45RO, CD2, CD99，CD34, CD1a。

      (2)成熟型: B- CD20, CD79a，PAX5, T-CD38，CD45RO。

      ▲NK/T淋巴瘤: CD56， CD3ε，CD45RO, TLA-1和EBER原位杂交。

      ▲间变性大细胞淋巴瘤: CD30， ALK，CD3ε。

     

     ▲浆细胞瘤: CD38, CD138，CD79a。

      ▲套细胞淋巴瘤: CyclinD-1, CD5, CD20, CD79a。 

     ▲血管免疫母细胞T淋巴瘤: CD3, CD45RO, CD21, CXCL13, CD10。

     

      ▲滤泡淋巴瘤: CD10, CD20, BCL2. CD21. BCL6。

    

      ▲伯基特( Burkitt)淋巴瘤: CD10, Ki67。

      ▲霍奇金淋巴瘤: CD30, CD15, CD20，PAX5。

      ▲组织细胞肉瘤: CD68, CD163。

      ▲树突细胞肉瘤: FDC-CD21, CD23, CD35, IDC-S-100，CD68。

      ▲朗格汉斯细胞: S-100, CDla。

      ▲细胞毒标记: TIA-1, perforin, granzyme B。

抗体的配伍

      目前生产的同类抗体，特异性、敏感度及广谱性有不同，为了达到满意的标记效果，一般同类抗体由2种以上抗体配伍应用，起到取长补短的作用。

      B细胞淋巴瘤标记

      ▲CD20：敏感，>95%阳性，但少数T淋巴细胞也可阳性，淋巴母和浆细胞阴性。

     ▲CD79a：敏感性及特异性较好，浆细胞阳性，生发中心B淋巴细胞阳性较弱。

      ▲PAX5：除浆细胞以外不成熟到成熟B淋巴细胞均阳性，特异性好。但R S细胞阳性。

     ▲CD20：搭配CD79a或PAX5全B淋巴细胞标记。

    

    T细胞淋巴瘤标记

      ▲CD3ε：敏感性较差，特异性高，> 95%T与NK细胞阳性。

      ▲CD45RO：高敏感性,但T淋巴母细胞阴性，少数B淋巴细胞阳性。

     

      ▲CD2:高敏感性，特异性全T标记，膜点型。

      ▲CD3与CD45RO或CD2搭配。

    其他特殊类型淋巴瘤标记抗体配伍

     ▲淋巴母细胞淋巴瘤: TIT, CD99。

     ▲套细胞淋巴瘤: CyelinD-1, CD5。

     ▲滤泡细胞瘤: CD10, CD20, BCL2。

     ▲Burkitt淋巴瘤: CD10, Ki67。
     ▲NKT细胞淋巴瘤: CD56, TIA-1, CD3ε。

     ▲经典型霍奇金淋巴瘤: CD30, CD15， PAX5。

     ▲组织细胞肉瘤: CD68, CD163。
     ▲滤泡树突细胞肉瘤: CD21, CD35。

     ▲指状突树突细胞肉瘤: S-100, CD68。
     ▲朗格汉斯细胞组织细胞增生症：S-100, CDla。

    如何正确识别与评价免疫组化结果

      正确识别与评价免疫组化结果是关键的环节。

   

    假阳性假阴性的识别

      ▲内外对照阳性而切片为阴性者为假阴性，相反为假阳性。

      ▲全切片为100%阴性可能为假阴性，相反可能为假阳性。

      ▲组织边缘与坏死细胞阳性，为假阳性。

      ▲设外对照以及使用前和使用中检测效价是保证免疫组化结果正确的保证(扁桃体为最佳外对照组织)。

  染色模式的正确识别

    ▲每种抗体阳性模式不同。
    胞膜型: CD45. CD20、CD4SRO, CD5、CD43. CD1a。

    核型: TJT, CyelinD-1. PAXS, Ki67。
    胞浆型: CD79a、CD38. CD68. TIA-1. GrB、Perf, CD21。

    膜点型: CD30、CD15、CD2。

    核质型: ALK、s 100。

     不正确的染色模式视为染色失败。

     阳性标记细胞是瘤细胞或反应性细胞的识别

     ▲淋巴瘤组成细胞除瘤细胞外均伴有数量不等的反应性细胞或残留的T淋巴细胞或B淋巴细胞、组织细胞及粒细胞等。

      ▲认真确定瘤细胞阳性抗体。

      ▲不能盲目地以阳性优势细胞为分型或定性依据，富于T细胞的大B细胞淋巴瘤( TCRLBCL)，NLPHL、LRCHL、淋巴组织细胞型ALCL均可表现为反应性细胞占优势。

      ▲反应性细胞或残留细胞均为成熟性无异型，后者常为岛片状或近边分布。(图2-16)。

    标记抗体的非特异性的识别

      ▲几乎不存在100%特异性抗体，一新抗体往往开始认为特异，而后来发现不特异。

      ▲CD20, CD45RO, CD43标记可在T淋巴细胞或B淋巴细胞之间交叉阳性; CD45RO, CD43在组织细胞、髓细胞标记可阳性。

       ▲有少数淋巴细胞为T淋巴细胞与8淋巴细胞双阳或Null型。

      ▲CD30、CD15除R-S细胞阳性外，活化淋巴细胞、 胚胎性癌细胞、未分化癌细胞亦可阳性，特别是胞质阳性特异性很差。

附 表：

以下就2例T细胞淋巴瘤分享如下：

01

血管免疫母细胞性

T细胞淋巴瘤

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤HE  ↑

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤KI67  ↑

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤CD34  ↑

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤CD21   ↑

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤CD5  ↑ 

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤CD3  ↑

淋巴结结构破坏，小至中等大小的淋巴细胞成簇或弥漫性增生，血管增生明显。散在可见浆细胞及少量嗜酸性粒细胞浸润。 会诊意见： （左颈部淋巴结）结合形态及免疫组化结果，符合血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤。 免疫组织化学：CD3、CD43、CD5（细胞+），PD1（少量细胞+），MUM1（浆细胞+），CD21、CD23（示滤泡树突 网结构变形），BCL2、BCL6、CXCL13、Cyclin D1、CD20、CD79a、C-MYC、MPO（均-），ki67（约50% +）。

02

皮下脂膜炎样T细胞性淋巴瘤

皮下脂膜炎样T细胞性淋巴瘤(图）  ↑

皮下脂膜炎样T细胞性淋巴瘤HE  ↑

皮下脂膜炎样T细胞性淋巴瘤CD56  ↑

皮下脂膜炎样T细胞性淋巴瘤TGrB  ↑

皮下脂膜炎样T细胞性淋巴瘤Ki-67  ↑

皮下脂膜炎样T细胞性淋巴瘤TIA-1  ↑

皮下脂膜炎样T细胞性淋巴瘤