阴道分泌物形态学检查规范化指南

文进玲玉 2023-08-06 发布于江苏

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（一）分泌物涂片制备

1. 湿片制备：可按需向试管内滴加大约0.5 ml的0.9%氯化钠（NaCl）溶液洗脱阴道拭子制成悬浊液，或直接滴加1~2滴0.9% NaCl溶液至洁净载玻片上，再将拭子放在溶液中混合，制成厚薄适宜的涂片，以能透视纸上字迹为宜，盖上盖玻片待检。

2. 干片制备：直接将阴道拭子均匀涂布在洁净的玻片上，制成厚薄适宜的涂片，待自然晾干后，利用酒精灯快速烘干固定，再进行革兰染色；或根据临床需求和病原微生物特点选择其他染色方法进行染色，待玻片干燥后镜检。

（二）显微镜镜检

1. 湿片镜检：先在低倍镜（10×10）下快速浏览全片，评估涂片质量。再用高倍镜（10×40）进行仔细辨认，建议随机选择至少10个高倍镜视野，镜下观察上皮细胞、杆菌、球菌、白细胞以进行清洁度分级，同时观察是否存在线索细胞、阴道毛滴虫、真菌等病原微生物。湿片有助于阴道毛滴虫的检出。滴加1~2滴10% 氢氧化钾溶液，可快速溶解细胞、阴道毛滴虫和黏液丝等有形成分，提高真菌检出率。湿片法未检出阴道毛滴虫和真菌，并不能排除病原微生物感染，因为与核酸扩增法（nucleic acid amplification test，NAAT）检测滴虫和培养法检测真菌相比，湿片镜检的灵敏度约为50%。

（1）清洁度判定标准：清洁度判定主要根据杆菌、球菌、白细胞和上皮细胞4项指标，以“Ⅰ~Ⅳ度”进行分级报告，见表1。Ⅰ~Ⅱ度多为正常，Ⅲ或Ⅳ度为异常。但清洁度判定存在一定的局限性，临床不再单纯使用清洁度进行阴道炎症的诊断，而随着阴道微生态评价的临床应用，清洁度的应用价值逐渐下降。

（2）Amsel标准：Amsel标准是BV诊断的临床标准。以下4项指标中，满足至少3项即可诊断BV：

①阴道分泌物性状为灰白色、均质、稀薄；

②阴道分泌物pH值>4.5；

③胺试验阳性；

④湿片镜检中，线索细胞数量>20%的阴道上皮细胞总量。Asmel标准操作简单，对实验室条件要求不高，且成本较低，因此部分实验室条件有限的基层机构常依赖此标准进行BV的诊断。但与革兰染色镜检相比，其灵敏度和特异度较低，尤其是灵敏度仅为60%~72%，易导致漏诊情况的发生。

（3）Donders评分标准：Donders评分是基于生理盐水湿片法，利用相差显微镜对乳杆菌、白细胞数量、含中毒颗粒的白细胞比例、背景菌群和基底旁上皮细胞（parabasal epitheliocytes，PBC）比例进行评价分级的评分标准，目前在国内外被推荐用于需氧性阴道炎（aerobic vaginitis，AV）的辅助诊断，其具体评分标准见表2。但该法使用相差显微镜直接湿片镜检，未进行染色，部分有形成分识别难度大，限制了使用范围。近年来，有国内专家提出了基于革兰染色涂片联合临床特征的改良AV诊断标准。

2. 干片镜检：

（1）革兰染色：革兰染色是细菌和真菌检测最常用的方法。先在低倍镜下大致浏览全片，再转至油镜（10×100），仔细辨别细菌、真菌、阴道毛滴虫和线索细胞等。阴道分泌物中的真菌以假丝酵母菌为主，经革兰染色后的假丝酵母菌和细菌形态易鉴别，细胞成分更清晰，易于观察细胞、细菌和病原微生物，见表3；亦可进行阴道微生态评价，评估阴道菌群变化，包括菌群密集度、菌群多样性、优势菌等。阴道分泌物革兰染色镜检是BV实验室诊断的参考方法，用于评估乳杆菌、阴道加德纳菌及其他类杆菌、弯曲杆菌的BV特征，通过Nugent评分可用于BV的实验室诊断，其具体评分标准见表4。

（2）其他染色方法：除革兰染色以外，其他染色方法也在临床得到应用。如巴氏染色、瑞氏-吉姆萨染色有利于异常细胞的检出，但不能区分革兰阳性和革兰阴性细菌。荧光染色法灵敏度高，抗干扰能力强，但成本较高，可根据临床需求酌情选用。