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一、PAS染色 检验原理： PAS（Periodic Acid-Schiff stain）染色，又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用来显示糖原和其它多糖物质，过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，呈红色，定位于胞浆上。临床上常用于诊断细胞中糖元的丢失，黏液变性，霉菌，肿瘤等多种疾病。 PAS 染色是一种常用的组织化学染色方法。PAS 染色对于真菌病的诊断，虽然真菌在病理组织HE染色，有时可以显示出来，但其结构多不清楚。有些染色方法也可显示真菌，如革兰染色、硝酸银等方法，但都不如 PAS对真菌特异性强、着色鲜艳，因此，PAS 特殊染色对于真菌病的诊断具有重要意义。此外，PAS 染色可显示糖原、中性黏液物质、肾小球基底膜、寄生虫。PAS 染色可将组织中的黏多糖类物质染成樱桃红色，从而判定肿瘤细胞是否分泌糖原，并推断肿瘤细胞的起源及肿瘤细胞是否发生血管浸润。PAS也可使支气管黏膜的杯状细胞着色，但染色时温度不可高于 37℃，否则染色失败。PAS 糖原染色还应用于鉴别细胞内的空泡状变性，证明石蜡切片 HE 中所出现的细胞浆内空泡是否糖原被水溶性固定液溶解，还是脂肪被脂肪溶剂溶解；在心肌病变和心血管方面的疾病，可用以观察缺血缺氧早期的心肌坏死或梗死区的糖原减少。肿瘤组织的肝细胞癌，横纹肌、平滑肌和软骨肉瘤，汗腺瘤等，均有糖原的存在，可用PAS染色以辅助诊断。 主要染色步骤： 1.石蜡切片4μm，脱蜡至水洗。 2.蒸馏水洗1-2min。 3.用1%高碘酸水溶液氧化6-20min。 4.充分水洗。 5.用 Schiff 试剂浸染5-10min，如温度低时可延长浸染时间。 6.倾去 Schiff试剂，在流水中冲洗，直至流水颜色由红色变为无色。 7.用苏木素染液浅染胞核2-3min，过染时可用 0.5% 盐酸酒精液稍分化。 8.流水冲洗 5~10min。 9.逐级酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 需要注意的是高碘酸处理温度以不高于20℃为宜，室温高时，处理时间可适当缩短。Schiff染液染色时间可随温度调整，室温高可减少染色时间，冬季室温低，可延长至20min左右。 结果判读：
图A:圆形或椭圆形孢子的孢子壁为红色；图B:PAS标记的皮肤真菌；图C:PAS染色的脚趾甲甲真菌病；图D:肺新型隐球菌染成红色(图片来自参考文献1、2、3)；图E:肾脏PAS染色,基膜为红色；图F:富含糖原的肝细胞着色为红色，细胞核复染为蓝色；图G:肠道染色为紫红色（图片来自参考文献4）；图H:可见腺管颈部水平大量印戒细胞簇集在间质中；图I: 横纹肌瘤PAS染色阳性（图片来自参考文献6、7）。 二、D-PAS（淀粉酶消化法） 普通PAS染色法无法准确鉴别黏液物质(如黏液物质或多糖),本染色液在PAS染色之前有糖原消化步骤,需要做阳性对照。糖原消化时需要两张相同的切片，脱蜡后一张切片用含有淀粉酶的适当缓冲液处理，另一张仅用缓冲液处理。然后两张切片均用PAS法染色，消化后染色消失表明存在糖原。
例1诊断为糖原累积症，其PAS染色阳性(图1)，D-PAS染色阴性(图2)，证明其阳性物质为糖原；例2诊断为自身免疫性肝炎，PAS染色阳性(图3)，D-PAS染色亦阳性(图4)，则表明PAS阳性物质为非糖原物质。这些非糖原物质可能是慢性活动性肝炎中活化的巨噬细胞中的吞噬物质如Kupffer细胞内出现的脂褐素、酒精肝中的Mallory球形小体、胚胎性横纹肌肉瘤细胞质中的嗜伊红性小体等（图片来自参考文献5）。 三、AB-PAS（阿利新蓝-糖原染色） 正常粘膜上皮细胞可分泌粘液，分为中性粘液和酸性粘液，在HE染色中两者无法区分，常用粘液物质染色来区分；在病理状态下，胃、肠、结缔组织、心肌、肾脏等器官，也可以出现粘液变性、粘液水肿、黏蛋白增多的现象，也需要粘液物质染色区分和证明；在一些肿瘤的诊断和研究中也常常需要粘液染色进行观察和鉴别。主要分泌中性粘液物质的有胃粘膜的表皮上皮、十二指肠肠腺、颌下腺和前列腺上皮等；主要分泌酸性粘液物质的有呼吸道和消化道的杯状细胞、主动脉壁、软骨基质、角膜和皮肤等。 阿利新蓝（又称阿尔辛蓝，AB）和过碘酸雪夫（PAS）技术联合使用可鉴别同一组织中的中性黏蛋白和酸性黏蛋白。阿利新蓝是显示酸性粘液物质最特异的染料，这种阳离子染料与酸性基团形成盐键，也即阿利新蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。分子中带正电荷的盐键与酸性黏蛋白多糖物质中带负电荷的酸性基团结合形成不溶性的复合物而呈蓝色，再于PAS进行复合染色，就能显示三种不同黏液物质成分。结果判读：AB-PAS：酸性粘液物质呈蓝色，中性粘液物质呈红色，细胞核呈浅蓝色。 例：
图1: 正常胃黏膜组织；图2:正常胃黏膜上皮胞质分泌中性黏蛋白被AB-PAS染成紫红色；图3，4：胃黏膜反应性增生（HE）；图5：胃黏膜反应性增生伴肠上皮化生，杯状细胞分泌酸性黏蛋白被AB-PAS染成蓝色；图6：胃黏膜反应性增生，腺体胞质内可见AB-PAS阳性的中性黏液颗粒；图7：低级别异型增生（HE）图8：低级别异型增生区域表面黏蛋白颗分泌缺失；图9：高级别异型增生（HE） 图：10高级别异型增生区域表面黏蛋白颗粒分泌缺失（图片来自参考文献8）。
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