今天我们就来看看在细胞培养过程中血清使用方面常见的问题,如:血清储存条件、如何程序解冻、细胞污染与血清之间的关系、传说中的“黑胶虫”是什么以及血清热灭活是否有必要等等,“工欲善其事,必先利其器”,通过今天的解析与学习可以让我们在做细胞培养相关实验时事半功倍!那我们就开始吧~ Q1. 血清长期储存的条件和方法 Q2. 如何进行血清的程序性解冻? 程序性解冻血清可以确保血清制品质量的稳定性,且不会因为温差过大而析出过多蛋白等沉淀。程序性解冻方法是于实验开始之前将冷冻的血清置于4℃冰箱中融解,并且在解冻过程中每隔1小时摇匀一次,使温度与成分均一,减少沉淀析出,直至全部解冻,然后再移入室温条件下使用。 Q3.血清解冻后发现絮状沉淀该如何处理? 造成血清发生絮状沉淀的原因主要是血清解冻过程中温差带来了脂蛋白变性和纤维蛋白析出,沉淀本身不会影响血清质量,也不会对实验结果造成影响。但如必须处理沉淀,则可通过离心方式去除,如500-1000×g离心5-10 min。 Q4.血清沉淀是什么? 造成血清发生絮状沉淀的原因主要是血清解冻过程中温差带来了脂蛋白变性和纤维蛋白析出,沉淀本身不会影响血清质量,也不会对实验结果造成影响。但如必须处理沉淀,则可通过离心方式去除,如500-1000×g离心5-10 min。 Q5.血清中的小黑点是什么? 血清解冻过程温差过大、经反复冻融或通过热灭活处理后更容易产生沉淀,这些沉淀物在镜下观察时有一些会呈现以布朗运动的小黑点,业内流行一种“黑胶虫”污染的说法,但“黑胶虫”一直以来都是极为神秘的存在,至今科学家们也没有完整的实验结果可以证实它究竟是一种生物还是非生物,更有人认为“黑胶虫”是血清的原虫,或误以为是细菌或真菌污染。但科学家通过进一步的研究发现它们更可能是血清中的蛋白结晶。这种结晶可能为蛋白析出,如纤维蛋白原凝结成纤维蛋白;或是盐析出,如磷酸钙等;也有一些是胆固醇和脂肪酸。以下图片就证实了这一说法,如纤维蛋白和磷酸钙。 Q6.如何判断血清污染? (1)首先检查并判断外包装是否有破损,一般瓶身破损的血清发生污染的可能性极大; (2) 将血清接种到血酯板上,培养后看是否有菌落形成; Q7.细胞形态不正常、生长状态异常或增殖速率缓慢是否与血清有关? Q8. 如何做血清的梯度替换? 当细胞培养实验需更换血清品牌时,做程序性梯度替换方案尤为重要,因为不同品牌的血清所含成分有所差异,血清更换会使细胞发生不适,从而出现细胞增殖缓慢或细胞状态不佳等情况。建议的梯度替换方法。下图为HyCyte®预筛选胎牛血清更改的示意图。 Q9. 培养基中添加血清和抗生素后可长期保存吗? Q10. 血清的热灭活是必须的吗? Q11. 血清热灭活应如何操作? 实验表明,经热灭活处理的血清对细胞生长可能仅有微小促进或完全没有任何作用,甚至通常因高温处理而损失掉血清中部分营养成分从而影响血清质量,造成细胞生长速率降低。热灭活过程中因局部温度过高、摇晃不均匀或灭活时间过长,都会造成血清品质下降,且经热灭活后的血清会增加发生蛋白沉淀概率。因此,若非必须血清不需要做热灭活,而少数对补体敏感的细胞实验,如某些免疫学实验或腺病毒包装等,可酌情对血清进行热灭活操作。 |
|