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图解流式 | 第11期. 流式荧光染料被激发后的“行程”

 新用户4064dVjo 2023-09-11 发布于北京
作为分析仪器,流式细胞术依赖于激光对单个细胞的检测以及对产生荧光和散射光的信号收集。那它是如何收集荧光信号的呢?就让我们一起来学习吧!

流式仪器的光路系统简述

如下图所示,每一个排列通过的单细胞/多聚体/细胞碎片/杂质单个细胞经过时,会被激光器激发,上一期我们提及流式主要的激光器有5种(UV/Violet/Blue/Yellow-Green/Red Laser),根据不同流式仪器可能配有2种(Blue/ Red激光器),4种或5种(主要区别在有无UV激光器),激光光源的光束在达到流动室前,先经过透镜,将其聚焦,形成几何尺寸约为22×66μm 即短轴稍大于细胞直径的光斑(此处仅需理解透镜的作用为收集尽可能多的光,而且光束不会会聚,便于后续的分析),接下来在二向色镜的作用下,分出不同波长的平行光束(即“分道扬镳“,在不同的通道被检测),比如600LP的二向色镜只允许波长高于600nm的通过(此处仅需理解二向色镜的作用为只接收特定光谱带的光),再进一步借助滤光片的作用,过滤特定波长区间的光,到达PMT(光电倍增管),被其检测并转换成电信号。

上一期我们已经简单提及滤光片,如下图所框出的710/50BP滤光片代表可以滤过685-735nm之间的光,也就能相对应检测BD公司研发的由405nm激光器(Violet)激发的染料BV711或是由561nm激光器(yellow)激发的染料PE-cy5.5

那么问题来了,BV711PE-Cy5.5可以同时用在一组实验中吗?是否会发生严重的串色?如下图所示,两者由相同的滤光片检测,且发射光谱类似,你的答案是什么?留个思考题,咱们下期解答。

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