百萤 LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针实验方案

概述

准备细胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分钟

洗涤细胞

在荧光显微镜下分析

注：该方案仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改。

操作方法

1.制备溶酶体染色溶液：

1.1解冻 LysoBrite 染料至室温。

1.2通过将20μL的500 X LysoBrite 染料稀释到10 mL Hanks和20 mm Hepes缓冲液或缓冲液（HBSS）中，制备染料工作溶液。

注1：对于一个96孔板，20μL的LysoBrite 染料就足够了。 在<-15℃下等分并储存未使用的LysoBrite 染料储备溶液。 保护它免受光照，避免反复冻融循环。

注2：荧光溶酶体指示剂的浓度根据具体应用而变化。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1贴壁细胞：a.在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。 b.将细胞在37℃，5％CO2培养箱中孵育30分钟。 c.用预热（37℃）Hanks和20mM Hepes缓冲液（HBSS）或您选择的缓冲液洗涤细胞两次，用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 d.使用配有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：a.将等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）加入细胞中。将细胞在37℃，5％CO2培养箱中孵育30分钟。 b.用预热（37℃）Hanks和20mM Hepes缓冲液（HBSS）或您选择的缓冲液洗涤细胞两次，用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 c.使用配备有所需过滤器组的荧光显微镜观察细胞。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为粘附细胞染色（见步骤2.1）。