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1. F. nucleatum可减少METTL3介导的m 6 A 在人类 CRC 细胞和 PDX 组织中的改变据报道，METTL3 可独立于其 m 6 促进某些 mRNA 的翻译。A 甲基转移酶活性 21 。.为了研究 METTL3 的 m 6 A 甲基转移酶活性是否与 METTL3 的 m 6 A 甲基转移酶活性无关 21 。A 甲基转移酶活性是否是导致 m 6 A 水平降低的原因。A水平的原因，作者构建了表达野生型METTL3或其催化突变体（aa395-398和DPPW-APPA）的质粒，并将其应用于F. nucleatum处理过的细胞中。野生型 METTL3 而非其催化突变体的异位表达可挽救由 F. nucleatum 引起的 m 6 A 水平的下降。A 水平的降低。此外，作者还试图确定 METTL3 介导的 m 6 A 修饰是否参与了 F nucleatum 导致的迁移增强。A 修饰是否与 F. nucleatum 处理诱导的 CRC 细胞迁移增强有关。与点印迹结果一致，透孔试验显示，过表达野生型 METTL3（而非其催化突变体）明显逆转了 F. nucleatum 处理刺激下 HCT116 细胞的迁移增强。综上所述，作者的数据表明，F. nucleatum会降低人CRC细胞的全局m 6 A修饰水平。A 修饰水平，从而通过下调 METTL3 促进 CRC 细胞的侵袭性。2. F. nucleatum 通过调节 Hippo-YAP 信号通路抑制 METTL3为了探索F. nucleatum如何抑制METTL3并进一步调节m 6 A修饰的平衡机制，作者筛选了F.A修饰的机制，作者筛选了F. nucleatum处理CRC细胞后激活的信号通路。作者通过实时定量 PCR（qRT-PCR）检测了与各种信号通路相关的靶基因，这些信号通路已被报道在 CRC 进展和转移中发挥了重要作用。作者发现，与 NF-κB 和 Hippo-YAP 信号通路相关的基因在 HCT116 和 LoVo 细胞中均被激活。作者分离了 HCT116 细胞的细胞质和细胞核成分，发现 F. nucleatum 增加了细胞核中 YAP 的比例。免疫荧光检测结果也证实了经 F. nucleatum 处理的细胞核中 YAP 含量显著增加。双荧光素酶报告检测 27 进一步证实了 F. nucleatum 激活了 CRC 细胞中的 YAP 信号转导。3.FOXD3 是 METTL3 的转录因子异位表达 FOXD3 能显著提高 METTL3 的 mRNA和蛋白水平。相反，当 FOXD3 被敲除时，METTL3 的 mRNA和蛋白水平明显降低。此外，过表达 FOXD3 会增加 m 6 A 的水平。A 的水平，而 FOXD3 的耗竭会降低 m 6 A 的水平。A 水平，这表明 FOXD3 是 METTL3 的正向调节因子。为了验证FOXD3是否是METTL3的直接转录因子，研究人员采用了染色质免疫共沉淀（ChIP）实验，结果发现FOXD3与METTL3启动子结合；在FOXD3-Primer1和FOXD3-Primer2区域，这两个区域可能都含有推定的FOXD3结合元件。此外，双荧光素酶报告实验证实，过表达 FOXD3 能显著增强 HCT116 细胞中 METTL3 荧光素酶的活性。这些结果表明，FOXD3 是 METTL3 的正转录因子。 |
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