| 氟苯尼考(Florfenicol)作为动物专用抗菌药,对多种动物细菌性疾病有很好的治疗效果,因而在兽医临床上广泛使用。进入动物体内的抗菌药大部分会以原药或者代谢产物的形式排出体外,残留于水体和土壤等环境中,影响环境微生物的耐药性质。解磷菌广泛存在于土壤环境中,是一类能够溶解难溶性磷酸盐,为植物的生长发育提供可直接利用磷元素的功能微生物。为了解氟苯尼考在土壤环境中残留对解磷菌的影响,试验建立土壤模型,利用微量肉汤二倍稀释法和Kirby Bauer(K-B)纸片扩散法测定土壤解磷菌对氟苯尼考等17种抗菌药的敏感性;采用ARDRA和ERIC-PCR分析方法测定氟苯尼考对土壤解磷菌基因多样性的影响;采用钼锑抗分光光度法测定氟苯尼考对土壤解磷菌解磷能力的影响。主要研究结果如下:1.氟苯尼考胁迫对土壤解磷菌耐药性的影响将氟苯尼考加入土壤中,使土壤含药浓度分别为0 mg/kg、0.1 mg/kg、1 mg/kg、10 mg/kg、100 mg/kg,采集加药前和加药后7 d、21 d、49 d的土样分离解磷菌。利用微量肉汤二倍稀释法和K-B纸片扩散法测定加药前与加药后土壤解磷菌对氟苯尼考及其他16种抗菌药的敏感性。结果表明,土壤解磷菌的耐药性和耐药率与氟苯尼考的残留浓度及作用时间成正比。17种抗菌药中,对氟苯尼考耐药的解磷菌对其中13种抗菌药的敏感性有不同程度的降低(P<0.05);对3种抗菌药不敏感(P>0.05);林可霉素对解磷菌无抑制作用。2.氟苯尼考胁迫对土壤解磷菌基因多样性的影响提取加药前和加药后7 d、21 d、49 d从土样中分离的解磷菌DNA,选用细菌引物27F和1492R扩增16S r DNA基因序列,选用Msp I、Afa I限制性内切酶进行ARDRA分析。结果显示,氟苯尼考残留浓度越大,OTUs类型数越少,药物作用21 d时,在100 mg/kg氟苯尼考浓度下,OTUs数/细菌数比值最低,为8.33%。对加药后21 d的解磷菌进行ERIC-PCR扩增,结果显示,药物浓度越高,ERIC-PCR图谱类型越少,多样性指数也随之降低。3.氟苯尼考胁迫对土壤解磷菌解磷能力的影响从土壤中分离得到10株解磷菌,将菌株接种至LB液体培养基中,30℃培养24 h作为种子液。在无机磷液体培养基中加入氟苯尼考,使培养基含药浓度分别为:0μg/m L、0.1μg/m L、1μg/m L、10μg/m L、50μg/m L。按照1%的接种量接种解磷菌,30℃培养5 d,每24 h取2 m L培养液,利用钼锑抗分光光度法测定培养液中速效磷含量。结果表明,10株解磷菌在50μg/m L药物浓度下,培养基中速效磷含量明显比其他药物浓度组的低;大部分菌株在0～50μg/m L的药物浓度区间内菌液中细菌数量变化不明显,0μg/m L和50μg/m L的药物浓度下,菌液浓度几乎一致。研究结果表明,氟苯尼考残留于土壤中导致解磷菌产生耐药性,且浓度越高,解磷菌基因多样越低,高浓度的氟苯尼考对解磷菌的解磷能力有一定的抑制作用。 ... |
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