 翻阅研究生时期材料时，偶然发现还保留着我导师给同门师兄弟写的一封长信，当年年少除了感到我导工作认真，并无特殊感觉，今日翻出，身处相似位置才感慨更深。以前在老师门下时，只觉得我导严厉到有点不近人情，现在看来以前想法是多么可笑和幼稚。真是，长大方知年少纯，回首才懂师恩深。 今日教师节，愿同为教师的你我，事随人愿，祝各位生命科学战友，诸事顺遂！  小编每天都整理和更新常用实验技术呦，收不到更新的文章并不是小编偷懒了，而是因为微信公众号平台更改了推送规则。如果想不错过精彩内容，记得点下“赞”和“在看”，同时星标一下公众号，这样每次新文章推送，就会第一时间出现在您订阅号列表里了 以下是信件原文，未作删改。 各位同学： 下面我针对这次做DNA慧星电泳试验，谈谈我的一些想法，以供大家今后试验时参考： 1、DNA慧星电泳试验，经过半年的试验与不断思考，今天总算成功了，这主要是大家的坚持不懈努力的结果。当然后面在正式药物试验时，能否在组与组之间有效果，还有许多因素会干扰试验结果。这就需要大家从饲养动物开始就应该注意各种影响因子的干扰，否则还会浪费时间与金钱。其实毕业论文的研究何尝不是如此呢！ 通过结果来看，DNA慧星电泳试验在其他条件不变的情况下，①要注意的是细胞的总数适宜，太多也不好，太少则找不到。② 注意脱胶，尤其第一层胶在4度时放置要长；③ 电泳后必须要有缓冲液尽量洗涤使高PH降至7.5左右，以便EB染色上去；④ 细胞裂解时间要长一些，这次发现大多数细胞没有出现慧星拖尾现象，我认为可能是胞解时间还是过短；⑤ 慧星图有些模糊不清晰是何因？大家考虑一下；我认为可能是：一是各种所配试剂的PH值是否发生变化？配制是否准确？二是各步之间在洗涤时有没有使残存的液体洗干净？另外，DNA试验一般用无钙镁PPS不会有影响；⑥ EB染色是否新鲜非常重要，冲洗时也要用无钙镁PPS为好；⑦象慧星试验等许多分子细胞生物学试验，大多要求是无菌，新鲜双蒸水，洁净操作，现在我们的试验，这一方面做得非常不好！ 2、关于荧光拍照问题： 能够做到制片这一步，实属不易，因为从动物给药到解剖，取样，制悬液，加试剂等，非常辛苦，但我想说的是，这只是万里长征走完了第一步，因为如果你在拍照时效果不好，那么最终你也无法拿到你想要的结果，直至无法发表论文。现在没有图的论文，是没有多少人相信你的实验结果的。国内外皆然。因此精心研究显微镜等相关仪器，是研究生的一项重要任务，不可轻视。我的前两届的学生也包括你们在内，在显微镜的使用上至今还是门外汉或知之甚少。 我通过两次荧光拍照，得到一些经验，现与大家共享： ①首先在试验前，你要仔细观察一下现在的显微镜是否正常？如有问题，可及时汇报，以免担当不必要的责任； ②开机前用擦镜纸或手纸将镜头、载物台、反光镜各部位擦干净；你带去的甘油封片的下面和玻片上过多的液体擦干净，否则会玷污镜头和影响玻片的移动； ③打开电脑，遇到提示安装软件时按ESC，遇输入密码时，按Enter进入； ④先在最低倍镜下，定位与找到阳性斑或目标物，然后逐步转换镜头。但在使用油镜时，需要另外调。 ⑤在使用普通光镜拍照时，要注意光源开关开启的大小；载台下的反射镜位置高低；看看摄像头后方的拉杆是否有人动过，这一点很重要，否则会造成照片背景非常脏。 ⑥当在动态预览中看到图像不是太清楚时，可直接在目镜下看图像是否清晰？一旦清晰，可直接看预览曝光栏中的数字是多少？如果此时你拍照的话，拍下来的图并不是最佳。巧妙的办法是把预览曝光栏下面的拍摄曝光栏中的数字中的“mm，（分）”改为与上述的预览曝光栏中的“mm，（分）”数字一样即可。如上面的mm数字是317，那么下面的拍摄曝光也改为317。 ⑦如果发现图像不清楚的话，还可以将载物台下面的反射镜进行上调，可增加清晰度与亮度。 ⑧在荧光下，调亮度开关，插入滤光镜等，都不能改变图像的质量。 ⑨在油镜1000倍的情况下，会发现在视野中只有1－4个细胞等，这很正常。建议以后发表论文时要拍油镜下的图像。 最后，对大家提几点做研究的意见： 1、如果大家真的是为提高自己的专业水平来考研究生的话，我希望大家静下心来，不要过多地为如此浮躁的世事而困惑。而要多多加强理论学习，多看文献，多思考，争取在理论与实验技术上提高自己的水平。 2、对于本室以前的实验指标，我一般不提倡再做，不是以前的指标不好，而是要逐渐深入才行。因此，一个新指标的研究，必然要费时间，费精力，费经费，不可能一帆风顺。对于实验中出现的问题，我们不要泄气，而要勇于思考，多请教别人，巧妙设计，这样才能有进步！ 3、鉴于大家以前在试验技术与理论上均没有多少知识，如果你不能多学习多做实验来提高，那么你也就永远没有进步。如果所有的问题，都要我来查资料找问题来设计，这样是不行的。假使我图省事，随便找一些试验指标来给你做，这也对你们是一种不负责任的做法。如果有同学确实为文凭而考研的，那么也请你提前告许我，我会现在专门为你设计一个课题，这也可以。但你不要认为我糊你。所以我有话喜欢说在明处。 4、在当前我院仪器不全，条件有限的情况下，我尽一切可能创造条件来让大家做实验，一方面是源于我对大家的负责，另一方面也是我自己特别喜欢科学研究的原故，所以希望大家珍惜时间，能体谅我的难处。其实，做毕业论文对于学生和老师来说，是一个双赢的体现。不管将来你做什么工作，我想在读研期间，通过系统的学习理论，建立良好的思维方式与做人原则，对你的将来是非常有好处的。很难想象，一个做什么事情都无所谓的人，未来能在社会上有所作为的。你能认真地做好现在的事情，那么这种认真的态度，将来你做任何事情都能成功。为什么？因为你做事认真刻苦，还有什么样的困难把你难住？ 5、态度决定人生。成功源于勤奋，思考，加上行动！还要有面对困境的勇气！ 以上是我的一些想法，说出来，供大家参考，不妥之处，请谅解！ 祝大家新年好运！一帆风顺！心想事成！ 我导名字 2009.1.12 |
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