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利用兔单B细胞技术制备高亲和力、多种表位的抗独特型单克隆抗体

 普健科研小助理 2023-11-02 发布于湖北

治疗性抗体这一类药物的迅速发展势如破竹,独具四大特性:高亲和力、专一性强、半衰期长以及药理学效力强大。这些特性犹如生命的绿色通道,使得治疗性抗体成为了开发针对多种人类疾病的有效治疗方法的成熟平台。它们的应用领域广泛,不仅限于标准的免疫球蛋白G (IgG)格式,还可以扩展到抗体片段(scFv, VHH)、药物偶联物以及双特异性等新型格式的“不可药物化”靶点,充分展现了其应用的多样性。随着众多抗体治疗药物的研发不断进入临床前开发和临床试验阶段,这些项目对高质量的关键生物分析试剂的需求愈加严格。在这种情况下,抗独特型试剂抗体(anti-IDs)已成为临床前和临床阶段生物分析应用的优选方案之一,常用的制备方法包括杂交瘤技术、噬菌体展示免疫抗体库或合成抗体库以及单个B细胞技术。

兔单抗以其高亲和力和多样性在基础研究和药物研发中颇受青睐。兔单抗与传统的杂交瘤鼠单抗相比具有更好的抗原识别功能。由于兔骨髓瘤细胞株受专利保护,无法利用杂交瘤技术开发兔单抗,普健生物建立了噬菌体展示抗体文库技术平台以及新型的 XtenTM Mab Single B兔单克隆抗体开发技术平台。


单个B细胞抗体制备技术是近年来新发展的一类快速制备单克隆抗体的技术,是根据每一个 B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列,以及每一个B细胞只产生一种特异性抗体的特性,从免疫动物脾组织或外周血中分离抗原特异性B细胞,通过单细胞PCR技术从分泌抗体的单个B细胞中扩增IgG重链和轻链可变区基因,然后在哺乳动物细胞内表达并获得具有生物活性的单克隆抗体。

高特异性:与小鼠和其他啮齿动物相比,兔免疫系统更优秀,产生的抗体特异性更强,亲和力更高

高稳定性:与常规小鼠生产的单克隆抗体相比,兔IgG结构稳定性高

高亲和力:兔的B细胞成熟过程产生的亲和力是啮齿动物的10-100

高多样性:兔拥有丰富的B细胞反应库,其产生的抗体在表位变异、突变、构象变化等方面优势显著,且多样性高

案例展示

Elisa binding o f Anti-pembrolizumab Antibody,pAbRabbit with pembrolizumab coating Antigen:

pembrolizumab1ug/mL

Anti-pembrolizumab Antibody,pAbRabbit dilution from 1000ng/mL EC50=9.566ng/mL

研究人员利用单个B细胞技术制备了抗独特型抗体(anti-IDs),通过兔抗体分子克隆、序列分析和表达、兔抗体结合亲和力和表位表征等进行验证,这种具有高度Ab1-CDRs特异性和更多样化表位的高亲和力抗独特型抗体(anti-IDs),为支持重组治疗性抗体项目的生物分析项目提供了切实的好处。

IMG_256

抗独特型抗体(anti-IDs)表位类型表征

参考文献

WeiYu Lin,Rapid identification of anti-idiotypic mAbs with high affinity and diverse epitopes by rabbit single B-cell sorting-culture and cloning technology,PLoS One,December 21, 2020

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