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【常规HE染色步骤】 1、二甲苯(Ⅰ)，10min 2、二甲苯(Ⅱ),10min （前两步脱蜡） 3、无水乙醇(Ⅰ)，5min 4、无水乙醇(Ⅱ)，5min 5、90%乙醇，5min 6、80%乙醇，5min 7、70%乙醇，5min 8、蒸馏水，5min （3-8步梯度乙醇水化） 9、苏木素（染核），10min 10、水稍洗，10s （①洗去多余的苏木素 ②蓝化：苏木精在弱碱性水中呈蓝色） 11、1%盐酸酒精分化10s （分化，去掉细胞质上的苏木素，使细胞核细胞质对比更清晰） 12、流水冲洗，30min （①洗去多余的盐酸酒精 ②蓝化） 13、0.5%伊红水溶液（染细胞质），5min 14、蒸馏水稍洗（洗去伊红），10s 15、80%乙醇，5min 16、90%乙醇，5min 17、95%乙醇，5min 18、100%乙醇(Ⅰ)，5min 19、100%乙醇(Ⅱ)，5min （13-19步梯度脱水） 20、二甲苯(Ⅰ)，5min 21、二甲苯(Ⅱ，5min （20-21步透明） 22、中性树胶封片。 注意：第21步，玻片从二甲苯中取出来以后必须要及时封片，不能等玻片要干后才封片！！！封片时滴加一滴中性树胶在组织上，盖上盖玻片，轻压赶走气泡！ 【HE染色结果】 HE染色结果：细胞核蓝色，细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不同的红色，红细胞、角蛋白等呈明亮的橙红色。如下图：
HE染色（人肾） 【HE制片的质量要求】 HE制片是病理医生用作病理诊断的基本和重要的依据之一，一张高质量的HE制片要做到： 1、切片完整、贴片恰当； 2、切片较薄和均匀； 3、无皱折； 4、无刀痕； 5、染色清晰、核浆分明、透明度好； 6、无固缩、龟裂、污染； 7、封胶适当、玻片清洁； 8、标签号码清楚，字体端正。 【HE制片的原理说明及染液配制】 1、脱蜡 切片在染色前必须脱蜡干净，脱蜡不干净会影响组织细胞的着染，即使着染，组织和细胞也会模糊不清。脱蜡一般用两级或三级脱蜡剂如二甲苯，时间为10～20分钟。如果脱蜡剂使用多次或室温较低，均需延长脱蜡时间。 苏木素染色原理：细胞核内带负电荷的染色质与带正电荷的苏木精碱性染料结合而被染色，苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。 （1）液 苏木素，1g （2）液 硫酸铝钾，20g A. 将（1）用玻棒搅拌使苏木精溶解。 B. 再将（2）加温溶解（70℃—80℃不必沸腾），即加入溶化的（1）液，继续加温至沸腾狀态（1—2分钟），移出火面，并在沸腾状下迅速加进氧花汞，将烧杯移入冰水中急冷，并不停摇动，使其完全冷却后，静止过夜，次日再过滤。 C. 在过滤后加进冰醋酸 ，即可使用。 （2）染液正常时，细胞核呈棕红色，经分色后呈浅红色，流水冲洗或碱化后呈蓝色。 （1）液 苏木素，5g 无水乙醇，50ml （2）液 硫酸铝钾，50g 蒸馏水，650ml 甘油，300ml 冰醋酸，20ml A. 将（1）用玻棒搅拌使苏木精溶解。 B. 再将（2）加温溶解（40℃—50℃），用玻璃棒搅拌至彻底溶解，恢复至室温。 C. 将（1）液和（2）液充分混合。 D.加入碘酸钠，然后加入甘油，最后加入冰醋酸。 （1）液 苏木素，1g 蒸馏水，1000ml （2） 碘酸钠，0.2g 硫酸铝铵/钾，50g 柠檬酸，1g 水合氯醛，50g A. 将蒸馏水加热至40℃—50℃，加入苏木精用玻棒搅拌之彻底溶解。 B. 再将碘酸钠和硫酸铝钾，用玻棒搅拌之彻底溶解。 C. 最后加入柠檬酸和水合氯醛，此时染液呈淡紫红色。 D. 过滤染液，放置4℃冰箱可保存1-2年。使用前需恢复至室温。 苏木精染液的鉴定方法 （1）将几滴苏木素滴入自来水内，在滴下的一瞬间由红色转为紫色再转为蓝色慢慢扩散，则质量好。 （2）取一块滤纸滴入苏木精2滴，苏木精再滤纸上扩散后呈一紫酱色圆斑，圆斑的周边最后呈黑紫色，则质量好。 （3）染一张阑尾切片，阑尾组织中的淋巴滤泡内的细胞核深蓝，核浆比对清晰。 分化是把过染的细胞核部分和不应着染苏木精的细胞浆等组织成分脱色，从而使着染的细胞核与细胞浆及细胞周围的组织成分对比清晰。分化时间的长短视组织的性质，切片的厚薄，苏木精染色的深浅和分化液的新旧来决定，一般是8-10秒钟，若切片不分化或分化不足，组织不仅着染细胞核，也着染细胞浆等其他成分，使组织结构对比不清晰；若分化过度，细胞核过淡或褪色。盐酸乙醇分化后，一般需流水冲冼，避免切片留有盐酸，使细胞核褪色。另一方面苏木精经酸后要经流水冲洗来促兰。流水冲冼一般需30分钟以上。 浓盐酸 ，1ml 70%乙醇，99ml 伊红染色原理：伊红是一种酸性染料，在溶液中离解成带负电荷的阴离子与蛋白质的氨基正电荷结合而使细胞质染色。 伊红Y，0.25～0.5g 蒸馏水，100ml 冰醋酸，1～3滴 伊红Y，0.25～0.5g 80%乙醇，100ml 切片经HE染色后，要彻底通过各级乙醇脱水和二甲苯透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。 切片染色后封片常用中性树胶，酸性的树胶可使胞核褪色，如树胶放置时间过长，因氧化而变酸。中性树胶可用二甲苯稀释。树胶过浓，封片时容易导致气泡；过稀，封片时易使胶外溢，影响美观，也会出现由于二甲苯挥发后缺胶的现象. （全文完） |
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