网织红细胞计数及临床意义

网织红细胞（reticulocyte，Ret，RET）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞略大于成熟红细胞 (直径 8.0～9.5 μm)，其胞质中残存的嗜碱性物质 RNA 经碱性染料（如煌焦油蓝、新亚甲蓝等）活体染色后，形成蓝色或紫色的点粒状或丝网状沉淀物。

网织红细胞自骨髓释放到外周血液后仍具有合成血红蛋白的能力，约 1～2 天后，过渡为成熟红细胞 ICSH 将网织红细胞分为 4 型。

检测方法与原理

1、普通显微镜法：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞质内尚有嗜碱性的 RNA 物质，经新亚甲蓝或煌焦油蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色网状结构。

2、血液分析仪法：特殊染料与网织红细胞中 RNA 结合后进行 RNA 定量，可精确计数网织红细胞占红细胞的百分数 (Ret%), 并可根据 RNA 含量将网织红细胞分类及计算网织红细胞其他参数。

普通显微镜法

1、染色液

①新亚甲蓝枸橼酸氯化钠染色液：新亚甲蓝 0.1 g 溶于 100 mL 枸橼酸氯化钠溶液内 (1 体积 30 g/L 枸橡酸钠溶液与 4 体积 9.0g/L 氯化钠溶液混合)，充分混匀，待染料溶解后过滤。

②煌焦油蓝生理盐水染色液：煌焦油蓝 1.0 g、枸橼酸钠 0.4 g、氯化钠 0.85 g，溶于双蒸馏水 100 mL 中，过滤后备用。

2、操作

①在小试管中加入染色液 2 滴；再加人静脉血（或末梢血) 2 滴，混后放置 37℃恒温水箱中。

②10 分钟后取 1 滴混悬液制成涂片。

③在油镜下直接观察 1000 个红细胞中 Ret 数。或以 Miller 窥盘计数法计数：Miler 窥盘 为一个厚为 1 mm、直径为 19 mm 的圆形玻片，玻片上用微细刻线画出两个正方形格子，大方格 B 面积为小方格 A 的 9 倍。置于目镜内，计数小方格内红细胞数 (将小方格内数得红细胞数乘以 9，折算成一个大方格内的红细胞数) 和大方格内的 Ret 数。

3、结果计算

①直接观察法：网织红细胞比例 = 计数 1000 个红细胞中的网织红细胞数 / 1000

②窥盘计数法：网织红细胞比例 = 大方格内网织红细胞数 /（小方格内红细胞数 ×9）

③网织红细胞绝对数 (个 / L)= 网织红细胞百分数 x 红细胞数 / L

④网织红细胞生成指数 (RPI)：RPI=（网织红细胞百分数 / 2）×(患者血细胞比容 / 0.45)

4、参考区间

①网织红细胞比例：成年人：0.005～0.015 新生儿：0.03～0.06；儿童：0.005～0.015

②网织红细胞绝对数成年人：（24～84）×10%/L

③RPI ：2

注意事项

1、标本应在 4 小时内进行处理。置于清洁的棕色瓶中保存，染色液应无沉淀。

2、新亚甲蓝染料为 WHO 所推荐，着色强且稳定，背景清晰，利于计数；室温 < 15 ℃ 时，放 37 ℃ 恒温水箱；用瑞氏 - 吉姆萨染液复染后，可使 Ret 计数结果减少。

3、目前临床常用血液分析仪法。使用 Miler 窥盘时为了控制 CV 在 10% 之内，要求在连续视野中小方格内需要计数的红细胞数。

4、正确辨认网织红细胞，外周血液网织红细胞主要为 V 型，凡含有 2 个或 2 个以上颗粒、且颗粒必须远离细胞边缘的红细胞均应计为网织红细胞。要与其它红细胞各种颗粒或包涵体鉴别。

临床意义

1、评价骨髓增生能力，判断贫血类型

①网织红细胞增多：表示骨髓造血功能旺盛，见于各种增生性贫血，溶血性贫血增多尤为显著。

②网织红细胞减少：是无效红细胞造血的指征，见于非增生性贫血（如铁、铜、维生素 B6、维生素 B12 缺乏）慢性病性贫血（如慢性炎症、恶性肿瘤、慢性肾衰竭、再生障碍性贫血等）。

③鉴别贫血：小细胞性贫血：当铁蛋白和转铁蛋白饱和度正常时，网织红细胞增常见于血红蛋白病，网织红细胞正常时常见于慢性炎症性疾病。

正细胞性贫血：网织红细胞增多常见于急性出血和溶血综合征，网织红细胞正常或降低常见于骨髓衰竭或慢性贫血。

大细胞性贫血：网织红细胞增多常提示用维生素 B12 或叶酸治疗。

④RPI>3 时，提示溶血性贫血或急性失血性贫血；RPI<2 时，则提示红细胞生成减少所致的贫血。

2、评价疗效

①观察贫血疗效：网织红细胞是贫血患者随访检查的项目之一。缺铁性贫血或巨幼细胞贫血经有效治疗 2～3 天后，网织红细胞开始上升，7～10 天达到最高峰（约 10%），2 周后逐渐降至正常水平。

②骨髓移植后监测：骨髓造血恢复：骨髓移植后第 21 天，如网织红细胞 > 15x10^9/L，常表示无移植并发症；若骨髓开始恢复造血功能，首先表现为 HFR 和 MFR 的升高，其次为网织红细胞升高。因此，RMI 的改变更为灵敏。

3、放疗和化疗的监测 

网织红细胞的动态观察可指导临床适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制。机体接受放疗、化疗后，如出现骨髓抑制，早期 HFR 和 MFR 降低，而后网织红细胞降低；停止治疗，骨髓功能恢复后，这些指标逐渐恢复。

4、药物影响 

许多药物可引起外周血液网织红细胞变化，可导致网织红细胞假阳性的药物有解热药、氯喳、左旋多巴、奎宁等；可导致网织红细胞假阴性的有硫哗瞟吟、氯霉素、甲氨蝶吟等。

网织红细胞的效应药物：Ret>1.5%：铁剂、维生素 B12 和叶酸。Ret<0.5%：硫唑嘌呤、氯霉素、卡马西平。