  动物脑组织灌注：10%水合氯醛（3ml/kg）或者异氟烷麻醉后，将大鼠仰卧位固定于鼠板上。胸腹部备皮后，沿剑突下行一横行切口至左右腋中线处，并沿两侧腋中线剪开肋骨，钝性分离心脏周围结缔组织，充分暴露心脏。从心尖搏动最强处插入钝头针送至主动脉，夹闭腹主动脉。先给予250ml 0.9%的生理盐水快速灌注，再给予4摄氏度250ml 4%的多聚甲醛固定。大鼠灌注后断头取脑，PBS清洗放入10%福尔马林中48-72小时，放入70%酒精中可长期保存。 1. 标本需新鲜、取材动作应轻缓；固定液至少是样本体积的5倍。 2. 固定前需确定层面及结构，避免浪费组织及寻找不佳（海马位于视交叉根部与四叠体之间）。 3. 切片大小一般为1.5*1.5*0.3cm。 4. 切片需平整，防止出现错位导致解剖层面误差。 1. 脱水前需将固定的组织取出，使用PBS溶液清洗组织块三次、每次30分钟，洗去渗入组织内的固定液。 2. 组织分别经75%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇（2次）、无水乙醇（2次）进行脱水，二甲苯（2次）进行透明及石蜡进行浸蜡。 3. 不同组织脱水、透明及浸蜡时间不同，建议同实验室老师们互相传授经验，建议预实验时使用不同的时间进行HE染色评定时间的合理性。 注意调整好组织方向，固定好组织，放于模具中间。 1. 浸泡时间不足时：蜡块凹陷，硬度和脆度不足，很难切出完整的组织；HE切片中的表现为组织结构不完整，染色对比明显，核染色质结构不清。 2. 浸泡时间过久：蜡块变硬、变脆，很难切出完整的组织；HE切片表现出组织结构不完整、容易脱片，染色红蓝比例不明显，核结构不清晰。 1. 脱水不良的组织蜡块：放入50ml装满液体石蜡的烧杯中，并置于60度温箱将其融化；待组织周围无固体石蜡后，将其迅速放入一个装有正丁醇与松节油（7：3混合）混合液的100ml磨口广口瓶中，封闭后放入60度温箱中2小时，从混合液中取出组织重新进入浸蜡过程，3个烧杯均浸泡1小时（文章号：1004-6879（2022）02-0163-02）。 2. 脱水过度：蜡块粗修后放入冰水中浸泡或用5mmol/L盐酸水浸泡或者用氨水等软化剂软化，再缓慢仔细的切片、比平时薄一点效果可能会更好。 |
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