带状疱疹疫苗纯化工艺浅析

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减毒活疫苗

默沙东和长春百克带状疱疹疫苗均为减毒活疫苗。带状疱疹减毒活疫苗常采用Oka毒株，以MRC-5细胞为培养体系，后通过裂解、浓缩等技术制造带状疱疹疫苗。

图1：减毒活疫苗生产工艺流程示例

当对于VZV病毒的纯化时，可以选择复合模式填料Capto Core 700，通过流穿模式去除宿主蛋白及宿主核酸等。相对于传统分子筛（常规上样量0.01~0.05 CV），Capto Core 700的上样量可达1~10 CV，具有显著优势。

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重组gE蛋白疫苗

图2：重组gE蛋白疫苗生产工艺流程示例

gE糖蛋白是HZ亚单位疫苗的主要候选蛋白。以GSK重组带状疱疹疫苗为例，gE糖蛋白经CHO细胞分泌表达后，收获培养上清，经层析纯化得到gE抗原。在gE抗原中加入AS01佐剂后制成带状疱疹疫苗。层析纯化过程包括离子交换层析、疏水相互作用层析和金属离子亲和层析。

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第一步层析采用阴离子层析填料Q Sepharose XL对收获液（调节pH至6.0）中的gE糖蛋白进行捕获，并用含低盐的捕获缓冲液进行淋洗。在此过程中，大量宿主蛋白流穿。经过高盐洗脱，蛋白得到提纯并起到浓缩的作用。

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第二步层析采用疏水填料，调节缓冲液盐浓度，并将pH调至7.5，进一步对gE蛋白进行精纯。

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第三步采用镍亲和层析，利用蛋白序列中的组氨酸，对目的蛋白和不同杂质进行分离。

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此外，结合发酵规模和蛋白表达量，最后一步也可以采用分子筛填料Superdex 200 pg，对gE蛋白进行高分辨率分离。

新一代Capto骨架系列填料具有高物理机械性能、高化学稳定性、高载量的特征，为gE重组蛋白的纯化提供了丰富的选择性，例如离子填料Capto Q、疏水层析填料Capto Butyl Impres以及Capto Phenyl Impres等。

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 gE-Fc融合蛋白疫苗

Fc融合蛋白赋予了所融合的蛋白多种特性，包括血浆半衰期延长、发挥Fc片段特有的功能效应等。绿竹生物带状疱疹疫苗采用的就是该工艺路线，将Oka毒株糖蛋白E (gE) 胞外区和人免疫球蛋白Fc段组成融合蛋白。由于Fc片段的存在，纯化过程可以采用ProteinA亲和层析填料进行第一步捕获。后续精纯可以采用离子层析、分子筛色谱等。

                           

图3：gE-Fc融合蛋白疫苗生产工艺流程示例

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CHO K1细胞培养上清经0.45 μm滤膜过滤后，采用MabSelect Sure LX亲和层析填料进行捕获。

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洗脱液经低pH灭活病毒，流经阴离子层析填料Q Sepharose Fast Flow或DEAE Sepharose Fast Flow进行精纯，去除宿主蛋白和宿主核酸等。

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最后采用分子筛填料Sephacryl S-400HR进行进一步精纯，gE-Fc蛋白纯度达到98%以上。