BioNTech mRNA疫苗表达载体图谱如下: BioNTech mRNA疫苗表达载体核心功能区介绍和注意事项: (1)启动子使用的是T7 启动子。体外转录推荐使用Thermo Fisher Scientific公司的mMESSAGE mMACHINE T7 Transcription Kit体外转录试剂盒。PS 此处非广,欢迎赛默飞来文合作! 另外,T7 RNA聚合酶转录起始位点为GGG,因此体外转录过程中,T7 RNA聚合酶转录出的mRNA的5'端会突出3个碱基GGG。不知道T7启动子和sp6启动子区别的看我往期文章: 《体外转录中的T7启动子和sp6启动子。如何去除体外转录mRNA 3'端的冗余碱基?》 T7启动子核心序列(图片来源于www.neb.cn) (2)外源基因克隆区在5'UTR和红色标记的stop coden之间。外源基因克隆位点因为没有限制性内切酶位点,因此构建推荐采用同源重组法构建质粒。 (3)载体上含有kozak序列,外源基因插入时需要含有其实密码子,另外起始密码子之后的第一个碱基最好优化成G(同义密码子优化),因为kozak序列的+4位为G时效果较好。 |
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