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Western blot怎么那么多内参?你选对了吗

 湛璿 2024-03-30 发布于云南

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内参,顾名思义,就是内部参照。它在 Western Blot 实验中起到了重要的作用,用于校正蛋白质样本的加载量差异和检测系统的误差。就像是一把尺子,可以让我们在比较不同样本之间的蛋白质表达时有一个基准。
那么,如何选择内参呢?一般来说,我们需要考虑以下几个因素:
1、蛋白表达丰度:内参应该在样本中稳定表达,且表达量相对较高,这样才能有效地检测到内参信号。
2、分子量:内参的分子量应该与目标蛋白的分子量有明显差异,以便在电泳分离时能够分开。
3、细胞类型和组织特异性:根据你的实验样本类型,选择适合的内参。例如,β-actin 常用于哺乳动物细胞,而 Tubulin 则更适合检测细胞骨架蛋白。

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推荐使用一些常见的内参,如 β-actin、GAPDH 和 HSP90。这些内参在大多数细胞类型中都有稳定表达,且分子量适中,容易检测。
在选择内参时,还需要注意一些实验细节。比如,确保内参和目标蛋白的抗体不相互干扰,并且在实验中正确地设置对照组,以验证内参的表达是否稳定。

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