|
结果： 最近的研究表明，TIL-B细胞是抗肿瘤免疫反应中多方面的参与者。然而，作者对它们在肿瘤免疫调节中的具体贡献仍存在重大的知识空白，这表明迫切需要进一步探索TIL-B细胞在癌症中的复杂参与，并进行更深入的研究，以了解其对治疗干预的潜在影响。为了进一步描述PDAC肿瘤微环境中B细胞谱系的多样性，作者对从两名PDAC患者的胰腺手术标本中获得的FACS纯化的CD45 CD19 B细胞进行了单细胞RNA测序（图1A和B）。经过质量控制后，应用主成分分析鉴定了24,089个B细胞中的差异表达基因，从而确定了三个B细胞主要簇（图1C）。通过差异基因表达分析，确定了每个细胞簇的特异性标记基因（图1D）。BANK1簇1的表达谱与非小细胞肺癌中的滤泡性B细胞相似。14 SSR4 + 簇2还富集了DERL3和HSP90B1，并且具有蛋白质合成的特征，类似于分泌抗体的B细胞。19 CD38 + 簇3表达了高水平的STMN1、TCL1A和MME，部分与生发中心B细胞一致。14 虽然作者也观察到了簇4的存在，但它在t-SNE图中与簇1-3的位置相距较远，并且高表达了T细胞基因，因此没有包含在进一步的分析中。
为了进一步研究CD38 + CD19 + B细胞的存在及其临床相关性，作者对来自作者的FUSCC队列的147例PDAC和45例癌旁样本的FFPE切片进行了多重免疫染色（图2A）。通过自动图像分析，作者观察到肿瘤和癌旁组织中CD38 + CD19 + B细胞浸润的不同水平（图2B）。与scRNA-seq分析一致，作者发现肿瘤中CD38 + CD19 + B细胞的丰度显著高于癌旁组织（p < 0.001，图2C）。此外，CD38 + CD19 + B细胞的数量增加可能与肿瘤大小增加、淋巴结转移、CA19-9水平升高和血管侵袭存在相关性（图2D）。接下来，作者对PDAC患者的新鲜肿瘤、癌旁组织和外周血进行了流式细胞术（图2E，补充图S2），并确认CD19 + CD38 + B细胞主要存在于肿瘤中，而不是癌旁组织和外周血（图2F）。总之，肿瘤中CD38 + CD19 + B细胞的丰富程度明显高于癌旁组织，并与患者的进展特征相关。这些发现进一步表明CD38 + CD19 + B细胞在胰腺导管腺癌的诊断和治疗中具有潜力作为靶点。
CD38 + CD19 + B细胞的存在预示着胰腺导管腺癌患者的预后不佳在发现CD38 + CD19 + B细胞浸润与肿瘤进展之间存在正相关后，作者利用了两个独立的队列，包括探索队列（作者的FUSCC队列；n = 147，FFPE切片）来探索这种细胞亚群是否能预测患者的预后，并进行外部验证（TCGA队列；n = 176，RNA-seq） 21 以验证CD38 + CD19 + B细胞在PDAC中的预后价值。值得注意的是，在任何队列中，总B细胞与PDAC患者的总体生存率（OS）无关（图3A和B），这表明PDAC中B细胞的高异质性。有趣的是，在这两个队列中，观察到肿瘤浸润CD38 + CD19 + B细胞丰度较高的患者的OS明显较短（p = 0.019，图3C；p = 0.0024，图3D）。此外，在排除年龄、性别、血管侵犯、神经侵犯、肿瘤大小和淋巴结状态等混杂变量后，Cox回归多变量分析显示CD38 + CD19 + B细胞的浸润作为PDAC的独立预后因子（图3E）。综合而言，这些研究结果表明，CD38 + CD19 + B细胞的浸润能够独立预测胰腺导管腺癌的不良预后。
CD38 + CD19 + B细胞与PDAC中的免疫抑制有关为了进一步阐明肿瘤微环境中CD38+CD19+ B细胞的潜在机制和功能意义，作者利用TCGA的转录组数据探索了CD38+ B细胞与其他功能性免疫细胞之间的相关性。通过相关性分析，作者观察到CD38+ B细胞的丰度与原始B细胞、记忆B细胞、记忆激活CD4+ T细胞、调节性T细胞（Tregs）和滤泡辅助T细胞的丰度呈正相关，表明这些细胞类型之间可能存在相互作用或功能关系。相反，它与记忆静止CD4+ T细胞、活化NK细胞、单核细胞、2型巨噬细胞和活化肥大细胞的丰度呈负相关（图4A）。重要的是，作者观察到CD38+ B细胞丰度较高的PDAC样本中，活化NK细胞的丰度减少，Treg的丰度增加（图4B和C），表明它们可能具有免疫抑制性表型。
CD38 + CD19 + B细胞在PDAC中的免疫调节特性接下来，作者使用单细胞RNA测序分析、组织分析和体外实验来探索CD38 + CD19 + B细胞的免疫特征（图5A）。首先评估了与B细胞发育和分化相关的经典标记物。在两个队列中，CD38 + B细胞表现出特定标记物的富集，包括膜金属内切肽酶（MME，也称为CD10）、白细胞介素10（IL-10）、Epstein-Barr病毒诱导的3（EBI3，也称为IL-27B或IL-35B）、转化生长因子β1（TGFB1，TGF-β）、颗粒酶B（GZMB）、CD5和CD21（图5B）。为了确认这些发现，作者在新鲜的PDAC肿瘤组织中进行流式细胞术，探索肿瘤内CD38 + CD19 + B细胞的表型（附图S4）。PDAC中的CD38 + CD19 + B细胞表达CD10、IgD、CD27和CXCR4的水平升高，而CD24的表达降低。然而，CD138和IgM的表达在CD38 + 细胞和它们的CD38 - 对应物之间没有显著差异（图5C）。此外，PDAC中的CD38 + CD19 + B细胞表达IL-10、IL-35、TGF-β、GZMB、TIM-1、CD5和CD21的水平更高（图5D）。综合而言，这些数据揭示了胰腺导管腺癌中具有调节特征的过渡性B细胞样B细胞亚群（图5E）。
操纵CD38 + CD19 + B细胞富集的微环境重新编程胰腺癌中的免疫抑制鉴于这些有力的证据，作者接下来询问是否在PDAC中操纵CD38 + CD19 + B细胞可以在体内重新编程免疫抑制的TME。为了模拟具有相关B细胞的人类PDAC，作者分选了脾脏的CD38 + CD19 + B细胞和CD38 − CD19 + B细胞，并通过尾静脉将这些细胞注入小鼠体内。此外，使用NK细胞耗竭来评估CD38 + CD19 + B细胞对肿瘤生长的影响是否基于NK细胞，并通过流式细胞术分析确认了成功的耗竭（图6A，补充图S5）。有趣的是，与CD38 − CD19 + B细胞相比，CD38 + CD19 + B细胞的移植显著促进了KPC肿瘤的生长（图6B-D），同时对小鼠体重没有明显影响（图6E）。这些发现表明CD38 + CD19 + 和CD38 − CD19 + B细胞在TME中具有对比的作用。此外，NK细胞耗竭消除了CD38 + /CD38 − CD19 + B细胞移植的抑制肿瘤表型（图6B-D）。
CD38抑制减少PDAC的生长并增强体内的TME敏感性接下来，作者进行了体内实验，探索胰腺导管腺癌的治疗策略。治疗后，通过每三天测量肿瘤大小来监测肿瘤生长，使用CD38抑制剂或载体进行治疗。为了验证CD38抑制剂对肿瘤的影响，作者还使用抗NK1.1抗体消耗了NK细胞（图7A）。
总结 总之，这项研究表明 PDAC 中 CD38 + CD19 + B 细胞与不良预后相关，并可能作为独立的预后因子，表现出调节性 B 细胞特征，并对 TME 中的免疫抑制起到贡献作用。深入研究这个亚群在高度免疫抑制的胰腺免疫微环境中的作用，以及开发有针对性和合理的治疗策略，将提高 PDAC 免疫治疗的效果。
|
