| 共 6 篇文章 |
|
GAPDH，Tubulin，Actin选哪个做WB内参更好？TubulinTubulin即微管蛋白，分子量约55 kDa，微管蛋白是球形分子，有两种类型：α微管蛋白(α-Tubulin)和β微管蛋白(β-Tubulin)。一般要选择目的蛋白与内参分子量相差至少5kD以上，才便于对结果分析。但要注意使用总蛋白为内参的时候，为了具有更好的线性范围和更严谨的结果，总蛋白的提取一定要获... 阅2046 转9 评0 公众公开 21-05-14 08:06 |
若不加SDS，蛋白会沉淀在胶上，但SDS过多会影响蛋白与膜的吸附。甲醇能使SDS与蛋白分离，甲醇浓度越高SDS与蛋白分离越快，但高浓度的甲醇对蛋白会有固定作用，不利于蛋白从胶里跑出来。所以多数情况下颜料和蛋白之间是一种不稳定的交联，这意味着在某些条件下，颜料会从交联的蛋白上脱落，又因为膜分子孔径以及膜对不同物质吸附能力的差异，颜... 阅341 转5 评0 公众公开 21-04-11 17:10 |
做WB实验出现杂带怎么办?最全解决方案在这里。原因：转膜时膜和胶中间有气泡，或抗体在膜上未均匀分散。解决方法：制备转膜凝胶时用玻棒赶去气泡;使用摇床孵育抗体。解决方法：充分溶解，加样前离心;换小浓度分离胶。原因：胶未配好(凝胶未能完全聚合，胶中有颗粒或气泡，凝胶未冷却好，);电压过高;解决方法：正确添加质量合格且未过期的 AP 及... 阅1 转自bigaunt19... 公众公开 21-01-18 08:39 |
原因：电转中膜和胶之间存在气泡。经验：很多实验室中使用的不是最新的设备，比如配胶用的海绵垫，如果用了很多年之后，会从下面往上面漏小气泡，当气泡足够小并且胶快凝固的时候，走到中间的小气泡就停留在胶内，并会影响到后面的跑胶。原因：配置胶有问题解决办法：把胶配好，不合格的胶坚决不用。可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应，比... 阅1 转自微笑如酒 公众公开 21-01-09 23:16 |
我好奇大家都是怎么调Western内参的？没错，跑出来的内参都不齐是吧，理想上内参应该是这样的是吧：核内参Lamin B1不适用与胚胎干细胞，血清蛋白内参Transferrin会受到维甲酸之类的药物影响。还有的蛋白内参15-17kDa，如果你检测蛋白和这个差不多大小，就不建议用这个内参。如果你尝试了很多次，在蛋白定量很OK的情况下，内参还是不齐，那就很... 阅1 转自yjt2004us 公众公开 20-12-29 23:15 |
其基本原理实混合蛋白质样本通过凝胶电泳分离后，通过特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（NC膜或PVDF 膜）上，将针对待测蛋白的特异性抗体作用于滤膜上，利用抗体上偶联的酶降解底物在滤膜上生成有色沉淀物或化学发光产物，从而显示出待测蛋白的存在及量。细胞（胞浆蛋白、胞膜蛋白、胞核蛋白）；电泳：浓缩胶80V；一般分为：湿式电印迹-最佳的... 阅1 转自yjt2004us 公众公开 20-06-30 22:42 |
