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吐血整理的五大外泌体标记方法，含原文献！相比于PKH-67，PKH-26具有更长的半衰期，标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。将PKH67标记的神经细胞外泌体与b.End3 细胞共培养后的荧光图。这些环境敏感性荧光染料在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强。一旦进入细胞后，Calcein-AM（本身不发荧光）被细胞内的... 阅1 转自Biotechsu... 公众公开 20-03-06 21:34 |
图1：circRNA的siRNA设计规则。更有趣的是，2号siRNA居然敲掉了线性mRNA,这更让作者怀疑circRNA和线性mRNA到底是谁在起作用。为此，作者巧妙地设计了三个siRNA: si-circ, targeting the circ-ZNF609 head-to-tail junction; si-ex2, targeting both the circRNA and its linear counterpart; si-mRNA, targeting only the linear mRNA .观察它... 阅147 转0 评0 公众公开 19-11-13 15:03 |
抗体多肽的设计原则。因为在大多数的天然（自然）环境中，亲水区域倾向于集中在蛋白表面，而疏水区域常常被包裹在蛋白内部，同样道理，抗体只能与在蛋白表面发现的识别区域相互作用，而当这些识别区域有足够的结构易变形性而转移到抗体可接触的位置时，将会与抗体间有很高的亲和性。大多数抗体是针对连续识别区域的，抗体能与这类区域以很高的... 阅898 转4 评0 公众公开 19-09-05 10:54 |
流式对照至少有 5 种：生物学对照，空白对照，同型对照（Isotype control），补偿对照（也叫单阳性对照）和 FMO 对照，主要目的是为了避免出现的假阳性或假阴性结果。在做蛋白免疫印迹时，只需考虑 Fab 的特异性就可以了，但是细胞的话稍微有点不同，因为有些细胞，特别是免疫细胞（B 细胞，T 细胞，巨噬细胞等等），它们表面有 Fc 受体，所以... 阅1741 转7 评0 公众公开 19-07-25 01:56 |
因此，他们把 GAL4 的两个结构域切分开，这样，BD 可以与目标蛋白结合，并且先行结合在报告基因 lacZ 上游的 UAS 区域，接着，把需要检验是否与目标蛋白相互作用的蛋白与 AD 结构域融合表达，如果目标蛋白和被检测蛋白可以相互作用，它们必定会在空间上相互接近彼此，这种相互作用可以使得 AD 和 BD 结构域也在空间上相互接近，这样就可以激活... 阅126 转2 评0 公众公开 19-07-25 00:08 |
献给初学者：如何选择合适的荧光蛋白。综合以上的介绍，在我们选择荧光蛋白时，首要考虑的是荧光蛋白的聚合性质，即是否会影响目的蛋白的功能及定位，其次是荧光蛋白的 PK 值是否与目的蛋白所处的环境的 pH 值相匹配，然后是荧光蛋白的成熟时间以及目的蛋白的寿命，综合两者决定荧光蛋白是否合适，最后考虑荧光蛋白的光稳定性、密码子偏好性是... 阅219 转1 评0 公众公开 19-07-24 23:54 |
最初形成肿瘤不一定是肿瘤干细胞（Cancer stem cells, CSCs），尽管肿瘤起始细胞（Cancer-initiating cells）与CSCs有时能够互换1。4.裸鼠移植瘤实验检测CSCs成瘤能力（对比普通肿瘤细胞和CSCs）；（1）建议体内成瘤实验之前先流式细胞术检测所培养肿瘤干细胞中肿瘤干细胞标志物，如乳腺癌干细胞标志物CD44+、CD24-等，既能说明培养方式未使肿... 阅1 转自yjt2004us 公众公开 19-06-17 14:02 |
干货 | 细胞信号通路图解之MAPK通路【值得珍藏】MAPK被MAPK的激酶( MAPKK)磷酸化后激活，MAPKK被MAPKK的激酶(MAPKKK )磷酸化而激活。（4）压力激活的蛋白激酶(Stress-activated protein kinase, SAPK)或称Jun氨基端激酶(Jun amino-terminal kinase, JNK) 是MAPK的家族成员，能被一系列的环境压力，炎症细胞因子，生长因子和GPCR激动剂所激活。... 阅2 转自yjt2004us 公众公开 19-03-14 00:40 |
大分子的标签，还有GFP蛋白，GFP基本上也是用于检测蛋白表达的，融合GFP后，可以通过GFP的荧光显示蛋白表达情况。SUMO标签也是一种大分子标签，SUMO标签可以作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣，不但可以进一步提高融合蛋白的表达量，且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠，提高重组蛋白可溶性等功能。首先如果把蛋白标签放到N端，对于... 阅1 转自微笑如酒 公众公开 19-03-08 00:26 |
流式细胞周期检测。在研究某个基因表达或者药物对细胞周期的影响，我们可以通过核酸染料PI标记DNA, 并由流式细胞仪进行分析，得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%、S%、G2 / M %，了解增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M... 阅276 转6 评0 公众公开 19-03-05 14:53 |
