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流式细胞周期检测

 连果啦啦 2019-03-05
  • 在研究某个基因表达或者药物对细胞周期的影响,我们可以通过核酸染料PI标记DNA, 并由流式细胞仪进行分析,得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%、S%、G2 / M %,了解增殖能力,在肿瘤病理学研究中,通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。今天,医学方小编和大家分享一下流式检测细胞周期原理和方法。

细胞周期(cell cycle):指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G0/G1期:有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,进入下一个细胞周期,或者进入静止期(G0期),而G0期从DNA含量上无法与G1期区分,细胞开始RNA和蛋白质的合成,但DNA含量仍保持二倍体。S期:DNA开始合成,细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。G2期和M期:当DNA复制成为4倍体时,细胞进入G2期。G2期细胞继续合成RNA及蛋白质,直到进入M期。从DNA含量我们同样无法区分G2期和M期。

流式细胞仪工作原理:

将待测细胞放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测,得到该细胞的光散射和荧光指标,分析出其DNA特征。

细胞周期检测的原理:

PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与DNA的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态,从而计算出各个期的百分含量。PI染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。

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