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qPCR进阶之路—PrimeTime 装备一览。荧光探针是qPCR实验的核心，确定实验目的后，首当其冲的是确定探针的类型，尤其是荧光基团和淬灭基团。图1则是来源于IDT并在科研界广为流传的荧光基团选择表：根据qPCR仪支持的荧光通道选择合适荧光基团。图1. 常见qPCR仪适配的荧光基团。当使用FAM荧光基团与不同淬灭基团：ZENTM-IBFQ、BHQ1、Eclipse??、IB... 阅1673 转18 评0 公众公开 18-09-13 17:51 |
下图是几种常用的荧光基团的发射光谱（图片来自于IDT），由图中可见，很多荧光光谱相近的荧光基团，它们虽然最大发射波长不同，但是在附近的波段内还是会有相互重叠的，一定要避免荧光基团发射光谱之间的相互干扰。3. 按照荧光定量PCR仪来选择荧光基团。在选完探针的荧光基团之后，根据荧光基团的种类搭配淬灭基团即可，多重qPCR并不要求淬灭基... 阅10622 转78 评1 公众公开 18-03-28 14:37 |
KASP-基于已知SNP的高通量基因分型KASP——基于已知SNP的高通量基因分型。SNP的研究主要分为SNP的发现及SNP的基因分型。SNP的发现是应用的基础，需要在一定数量样本的全基因组范围内，经过统计学分析得到少量可能与疾病或性状关联的SNPs。KASP（Kompetitive Allele Specific PCR，竞争性等位基因特异性PCR）因其经济灵活的特点，作为国际上主流... 阅14345 转85 评0 公众公开 18-01-17 22:35 |
我们在进行qPCR实验时，对于内参基因的选择往往会不假思索地选择GAPDH和β-actin或18S rRNA之类的内参基因。为什么18S rRNA被选作内参基因？同样是rRNA的5S rRNA和5.8S rRNA以及28S rRNA就不适合作为内参，因为①5S与5.8S在核糖体大亚基中的rRNA分子序列短，提供的信息少；其实不仅仅是GAPDH和β-actin或18S rRNA这三个基因在作为内参基因的存... 阅12716 转71 评0 公众公开 17-12-08 20:00 |
