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PMSF的配制、工作浓度及注意事项。【注意事项】1. PMSF剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。2. PMSF在水溶液中不稳定。3. PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节 为碱性（pH&... 阅2222 转3 评0 公众公开 12-06-25 20:47 |
常用抑制剂 PMSF1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);2)10mg/ml溶于异丙醇中;3)在室温下可保存一年;4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。亮抑蛋白酶肽(leupeptin)1)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋... 阅1058 转19 评0 公众公开 12-03-16 16:15 |
HMMTOP 预测蛋白序列的跨膜螺旋与拓扑结构服务器TMpred 预测蛋白序列跨膜区TMHMM 预测蛋白的跨膜螺旋The PredictProtein server 提供蛋白数据库查询，预测蛋白各种结构的服务SMART 提供蛋白序列，在结构域数据库中查询，显示出其结构域及跨膜区等SPLIT 膜蛋白二级结构预测服务器PRED-TMR 提供基于SwissProt数据库统计分析的预测蛋白跨膜片段的... 阅8321 转113 评0 公众公开 12-02-25 21:30 |
大肠杆菌的genotype说明，看懂大肠杆菌菌株的genotype总结了一些关于大肠杆菌基因型的资料，和大家分享一下。deo 操纵子位于大肠杆菌基因图谱100 min 的位置，它含有deoA、deoB、 deoC 和deoD 等结构基因，分别表达DNA 代谢所需的酶类，即胸腺嘧啶磷酸化酶、磷酸 转位酶、脱氧核糖磷酸醛缩酶和嘌呤核苷磷酸化酶。由recA 基因的变异所产生的基因... 阅1711 转25 评0 公众公开 12-02-23 23:29 |
蛋白质不表达：常见原因及分析 蛋白质不表达：常见原因及分析 1.载体构建错误。这种情况见于你的序列里正好含有和核糖体结合位点完全一致的序列。7、SD序列。考研时老师喜欢出名词解释，也难怪人家老是拿这个出题----SD序列和起始密码子序列（80%是AUG，也有GUG的）之间的距离，对蛋 白表达的效率也有着非常重要的影响。如果在mRNA的5''... 阅1004 转24 评0 公众公开 12-01-14 00:11 |
蛋白纯化经验指南。另外我的蛋白是用8M尿素裂解后用镍柱纯化的，洗涤液用的是含20ｍＭ咪唑，洗脱液用的是含250ｍＭ咪唑，但是纯化后跑SDS－PAGE发现，在洗涤液最后一管中己有我的目的蛋白，没有杂带，但在洗脱的第一管中就开始在紧邻我的目的蛋白的上方出现一条杂带，并随着我的目的蛋白洗脱浓度的降低而降低，后来我试用的增大洗涤液中咪唑浓... 阅9169 转65 评0 公众公开 12-01-02 14:49 |
用于基因组文库中的真核DNA的部分酶切：预反应 摘要： 本文主要介绍了用于基因组文库的真核DNA的部分酶切之预反应的实验方法.琼脂糖凝胶（0.6）,用0.5*TBE,含有0.5ug/ml的溴化乙锭.琼脂糖凝胶,用于脉冲场凝胶电泳 核酸和寡核苷酸：基因组DNA,高分子质量； 阅438 转1 评0 公众公开 11-12-23 19:17 |
包涵体蛋白的纯化和复性。【备注】超声破菌缓冲液（20 mmol/L Tris-HCl pH8.0、0.5mol/L NaCl、1 mmol/L EDTA、1 mg/mL溶菌酶）【备注】包涵体洗涤缓冲液（20 mmol/L Tris－HCl pH 8.0，0.5mol/L NaCl，2 mol/L尿素，2％ Triton）【备注】包涵体溶解缓冲液（20 mmol/L Tris－HCl pH8.0，0.5 mol/L NaCl，8 mol/L尿素，0.2 mmol/L DTT或100 mmol... 阅8879 转182 评1 公众公开 11-12-14 20:48 |
原核表达秘笈之宿主菌株选择指南。Rosetta 2Rosetta-gami 2Rosetta-gami BRosettaBlue.Origami 2Rosetta-gami 2Rosetta-gami B.重组质粒和菌株的保存建议 在实验室里保存重组菌株的时候，为了挑菌和传代方便，我们常用LB平板保存在4℃冰箱中，需要提质粒和表达接种的时候，就直接从平板上挑菌，但是这种方法对于重组质粒的稳定性不利，容... 阅461 转15 评0 公众公开 11-12-02 23:28 |
His-Tag 表达蛋白纯化原理组氨酸标签蛋白的纯化His-Tag融合蛋白是目前最常见的表达方式，而且很成熟，它的优点是表达方便而且基本不影响蛋白的活性，无论是表达的蛋白是可溶性的或者包涵体都可以用固定金属离子亲和色谱去（IMAC）纯化。3） 取1ml镍琼脂糖凝胶FF或镍NTA琼脂糖凝胶FF预装柱，用10ml平衡缓冲液平衡，然后取破碎上清10ml样品以0.5m... 阅1722 转18 评0 公众公开 11-09-19 20:38 |
