PCR的影响因素很多的,尤其试剂的保存,人为的因素都很重要:
看看试剂是否有过期或保存不当,可能出现部分变质所以P不出来,换新的试剂看看 人为也很重要,冰上操作的时间,步骤等对P的效果很有影响,可找实验经验好点的人再试一试. 如果是怀疑仪器方面的问题,我觉得也有可能,可以去别的试验室借PCR仪看看是否能行. 别用自己的胶检测,用别人的胶检测试试,以前我P的很好,但是胶有问题老是扩散,后来用别人的胶试了试,非常赞.
本文针对PCR产物序列中引入了错误怎么办?PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带?如果没有回收到目的片段,还需要作什么对照实验?或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带?对照实验结果好,却没有回收到目的片段,实验出了什么问题?
PCR体系是10ul的,每次PCR完了以后,管壁上有一层水气,需不需要覆盖矿务油?加多少,具体步骤应怎样? PCR加样孔上有很亮的条带,但没有产物条带? PCR的产量有许多因素决定他们的主次关系是什么,各因素又是怎么调节的? PCR产物大约有900bP,哪种测序方法比较好?直接用纯化的PCR产物测序还是克隆到T载体上再测序?纯化PCR产物的方法哪种比较好? 引物间形成了比较多的二聚体,使产物很少。这种情况该怎么处理? 为什么会产生弥散(smear)条带?如何解决? |
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