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常用染色液的配制
１．染料饱和酒精溶液的配制 配制染色液常先将染料配成可长期保存的饱和酒精溶液，用时再予以稀释配制。配制饱和酒精溶液，应先用少量95％酒精先在研钵中徐徐研磨，使染料充分溶解，再按其溶解度加于95％酒精之中，贮存于棕色瓶中即可。
附表1 几种常用染料在95%酒精中的溶解度(26℃)
染料名称 美 蓝 结晶紫 龙胆紫 碱性复红 沙黄 溶100mL95％酒精中的重量(g) 1.48 13.87 10.00 3.20 3.41 2．常用染色液的配制 （１）碱性美蓝(亦称骆氏美蓝)染色液：取美蓝饱和酒精溶液30ml，加入0.01％氢氧化钾水溶液l00mL，混合即成。此染色液在密闭条件下可保存多年。若将其在瓶中贮至半满，松塞棉塞，每日拔塞摇振数分钟，并不时加水补充失去的水分，约1年后可获得多色性，成为多色美蓝染色液。 （２）草酸铵结晶紫(亦称赫克结晶紫)染色液：取结晶紫饱和酒精溶液2mL，加蒸馏水18mL稀释10倍，再加入1％草酸铵水溶液80mL，混合过滤即成。 （３）革兰氏碘溶液：将碘化钾2g置乳钵中，加蒸馏水约5mL。再加入碘片1g，予以研磨，并徐徐加水，至完全溶解后，注入瓶中，被加蒸馏水至全量为300mL即成。此液可保存半年以上，当产生沉淀或褪色后即不能再用。 （４）沙黄水溶液：沙黄也称番红花红。将沙黄饱和酒精溶液以蒸馏水稀释10倍即成。此液保存期以不超过4个月为宜。 （５）石炭酸复红染色液：取3%复红酒精溶液10mL，加入5％石炭酸水溶液90mL混和过滤即成。 （６）稀释石炭酸复红染色液：将石炭酸复红染色液以蒸馏水稀释10倍即成。 （７）3％盐酸酒精(亦称含酸酒精)：加浓盐酸3mL于95%酒精97mL中即成。 （８）瑞士染色色液：取瑞氏染料0.1g置乳钵中，徐徐加入甲醇，研磨以促其溶解。将溶液倾入有色中性玻瓶中，并数次以甲醇洗涤乳钵，亦倾入瓶内，最后使全量为60mL即可。将此瓶置暗处过夜，次日滤过即成。此染色液须置于暗处，其保存期约为数月。 （９）姬姆萨染色液 取姬姆萨氏染料0.6g加于甘油50mL中，置55~60℃水浴中1.5~2h后，加入甲醇50mL，静置1日以上，滤过即成姬姆萨染色液原液。 临染色前，于每毫升蒸馏水中加人上述原液1滴，即成姬姆萨染色液。应当注意，所用蒸馏水必须为中性或微碱性，若蒸馏水偏酸，可于每l0mL左右蒸馏水加入1％碳酸钾溶液l滴，使其变成微碱性。
特殊染色法
1．荚膜染色法 （１）美蓝染色法：带负电荷的菌体与带正电荷的碱性染料结合成蓝色，而荚膜因不易着色而染成淡红色。抹片自然干燥，甲醇固定，以久储的多色性美蓝液作简单染色，荚膜呈淡红色，菌体呈蓝色。 注：多色性美蓝即碱性美蓝，亦称骆氏美蓝。 （２）瑞氏染色法或姬姆萨染色法：抹片自然干燥，甲醇固定，以瑞氏染色液或姬姆萨染色液染色，荚膜呈淡紫色，菌体呈蓝色。 （３）节氏(Jasmin)荚膜染色法：取9mL含有0.5％石炭酸的生理盐水，加入lmL无菌血清(各种动物的血清均可)混合后成为涂片稀释液。取此液一接种环置于载玻片上，又以接种环取细菌少许，均匀混悬其中，涂成薄层，任其自然干燥，在火焰上微微加热固定，然后置甲醇中处理，并立即取出，在火焰上烧去甲醇。以革兰氏染色液中的草酸铵结晶紫染色液染色0.5min，干燥后镜检。背景淡紫色，菌体深紫色，荚膜无色。 2．鞭毛染色法 （１） 莱氏(Leifson)鞭毛荚膜染色法 鞭毛宽一般约0.01~0.05微米，在普通光学显微镜下看不见，用特殊染色法在染料中加入明矾与鞣酸作媒染剂，让染料沉着于鞭毛上，使鞭毛增粗容易观察，染色时间愈长，鞭毛愈粗。 染色液：
钾明矾或明矾的饱和水溶液
20％鞣酸水溶液
蒸馏水
95％酒精
碱性复红饱和酒精溶液
依上列次序将各液混合，置于紧塞玻瓶中，其保存期为1个星期。 染色剂：
含染料90％的美蓝
硼砂(Borax) 蒸馏水 100mL 染色法：滴染色液于自然干燥的抹片上，在温暖处染色l0min，若不作荚膜染色，即可水洗，自然干燥后镜检。鞭毛呈红色；若作荚膜染色，可再滴加复染剂于抹片上，再染色5~l0min，水洗，任其干燥后镜检。荚膜呈红色，菌体呈蓝色。 （２）刘荣标氏鞭毛染色法 染色液： 溶液一： 5％石炭酸溶液 l0mL 鞣酸粉末 2g 饱和钾明矾水溶液 l0mL 溶液二：饱和结晶紫或龙胆紫酒精溶液。 用时取溶液一10份和溶液二l份，此混合液能在冰箱中保存7个月以上。 染色法：取幼龄培养物制成抹片，干燥及固定后以溶液一和溶液二的混合液在室温中染色2~3min，水洗，干燥后镜检。菌体和鞭毛均呈紫色。 （３）卡-吉二氏(Casares-Cill)鞭毛染色法 媒染剂： 鞣酸 10g 氯化铅(AICl3·6H20) 18g 氯化锌(ZnCl2) l0g 盐酸玫瑰色素(Rosanilline hydrochloride)或碱性复红 1.5g 60％酒精 40mL 先盛60％酒精10mL于乳钵中，再以上列次序将各物置乳钵中研磨以加速其溶解，然后徐徐加入剩余的酒精。此溶液可在室温中保存数年。此法染假单胞菌更好。 染色法：制片自然干燥后，将上述媒染剂作1：4稀释，滤纸过滤后滴于片上染2min。 水洗后加石炭酸复红染5min，水洗，自然干燥，镜检。菌体与鞭毛均呈红色。 3．芽孢染色法 （１）复红美蓝染色法：细菌的芽孢外面有较厚的芽孢膜，能防止一般染料的渗入，如用碱性复红、美蓝等作简单染色，芽孢不易着色。采用对芽孢膜有强力作用的化学媒染剂如石炭酸复红进行加温染色，芽孢着色牢固，一旦芽孢着色后，于酸类溶液处理也难使之脱色，因此再用碱性美蓝溶液复染，只能使菌体着色。 抹片经火焰固定后，滴加石炭酸复红液于片上，加热至生蒸汽，经2~3min，水洗。以5％醋酸脱色，至淡红色为止，水洗。以骆氏美蓝液复染0.5min，水洗。吸干或烘干，镜检，菌体呈蓝色，芽孢呈红色。 （２）孔雀绿—沙黄染色法：抹片经火焰固定后滴加5％孔雀绿水溶液于其上，加热30~60s,使生蒸汽3~4次。水洗0.5min，以0.5％沙黄水溶液复染0.5min。水洗，吸干镜检。菌体呈红色，芽孢呈绿色(所用玻片最好先以酸液处理，可防绿色褪色)。 4．异染颗粒染色法 异染颗粒的主要成分是核糖核酸和多偏磷酸盐，嗜碱性强，故用特殊染色法可染成与细菌其他部分不同的颜色。 （１）美蓝染色法：抹片在火焰中固定后，以多色性美蓝染色0.5min，水洗，吸干，镜检。菌体呈深蓝色，异染颗粒呈淡红色。 （２）亚氏（Albert）染色法：抹片在火焰中固定后，以亚氏染色液染色5min,水洗后再以碘溶液染色1min,水洗，吸干，镜检。菌体呈绿色，异染颗粒呈黑色。 亚伯特氏染色液和碘溶液的成分如下： 染色液： 甲苯胺蓝(Toludine blue) 0.15g 孔雀绿 0.20g 冰醋酸 lmL 95％酒精 2mL 蒸馏水 l00mL 碘溶液： 碘片 2g 碘化钾 3g 蒸馏水 300ml 将碘片和碘化钾在乳钵中研磨，先加40~50mL水，使其充分溶解，然后再加足量蒸馏水。 |
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