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质粒提取protocol
1.取 1.5 ml 过夜培养（OD1.6左右）细菌培养物于一Eppendorf管中，室温，12000g 离心 30 s（离心条件下同）。去上清，同样方法再次集菌 1.5 ml。最后，离心 15s，吸弃管中微量的培养液。 2.往沉淀中加入 200 μl 溶液Ⅰ，振荡器上剧烈振荡；加入200 μl 溶液 Ⅱ, 轻轻来回颠倒混匀 4-5 次 ,于冰上放置 5 min；加入 200 μl 溶液 Ⅲ，轻轻来回颠倒混匀 4-5 次，冰上放置 5 min。 3.离心 12 min。取上清, 加入0.7倍体积的异丙醇室温沉淀5min，室温离心（别的步骤可以4度离心，但这一步最好室温离心） 4min。吸干、弃上清。 4.用200ul水溶解沉淀，加200ul（等体积）5M 的LiCl洗去蛋白，-20度放置6min。离心，吸上清于另外一新管中。 5.加2倍体积的无水乙醇，室温5min。离心4min，弃上清。 6.500ul70％的乙醇洗涤，用枪头吹起来后，颠倒几次。5min。离心，弃上清。再离心，吸干微量的乙醇。 7.沉淀于超静台吹18min。（最好关闭灯光） 8.溶于双蒸水，约20ul。加1ulRNA酶37度烘箱消化30min，消化时EP管盖子敞开。冻存于-20度。 |
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