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细胞生长曲线测定

 藏粹 2011-07-05

细胞生长曲线

目录

概念
方法
  1. 计数法
  2. MTT法
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编辑本段概念

  细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后,经过短暂的悬浮然后贴壁,随后度过长短不同的潜伏期,即进入大量分裂的指数生长期。在细胞达到饱和密度后,停止生长,进入平顶期,然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化,典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期,斜率较大的指数生长期,呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。以存活细胞数(万/mL)对培养时间(h或d)作图,即得生长曲线。

编辑本段方法

计数法

  1.取生长良好接近汇合的细胞,用胰酶消化,用新培养基制成细胞悬液后计数(见四、细胞传代培养的实验步骤)。如是非粘壁细胞,则离心弃旧培养基后,换上一定量的新鲜培养基然后制成细胞悬液计数。
  2.根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104/mL作传代培养接种细胞,共接种21瓶细胞。
  3.24 h后开始计数细胞,以后每隔24 h计数一次,每次取3瓶细胞,分别进行计数。计算平均值。连续计数7 d。
  4.根据细胞计数结果,以单位细胞数(细胞数/mL)为纵坐标,以时间为横坐标绘制生长曲线。

MTT法

  1.制备1 mL细胞悬液。空白对照以1 mL培养基代替细胞悬液。加入0.1 mL MTT于37℃孵育4 h。使MTT还原为蓝紫色甲月赞结晶。
  2.加1 mL DTW脱色液,37℃至少静置30 min(甚至过液),使甲质颗粒充分溶解。
  3.吸取200 μL该溶解液至96孔板孔中,在酶标仪上读取OD值,检测波长570 nm,参考波长630 nm。
  4.每隔24 h测量一个点,每个点为3个平行样品的平均值。

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