植物亚细胞定位GFP表达载体的选择问题(页 1)

植物亚细胞定位GFP表达载体的选择问题

请问做植物某个基因蛋白的亚细胞定位一般选用什么类型的GFP表达载体呢?哪些载体效果比较好？谢谢！急！

kobehaha 发表于 2009-9-22 14:38

植物载体,还真没做过...
帮顶一下

孤风逐日 发表于 2009-9-22 19:32

做植物这方面的螺友可能较少，一直没等到给楼主好的建议

buliang84 发表于 2009-9-22 21:50

:'(继续等待

darlingziyu 发表于 2009-9-23 14:19

如果要打洋葱或者做转化的话，普通的启动子载体（如pCAMBIA，pMDC系列）就可以做亚细胞定位（把GUS或者其他的报告基因换成GFP，保证读码框正确）；
如果要做原生质体转化，就要选择小一点的载体，象PM999，BiFC系列。
另外，亚细胞定位不一定非要GFP的，RFP/YFP等等都可以。

buliang84 发表于 2009-9-23 19:37

[b] [url=http://www./bbs/redirect.php?goto=findpost&pid=225707&ptid=25775]5#[/url] [i]darlingziyu[/i] [/b]
:lol 谢谢，你是不是有做过这方面的呀？
pCAMBIA1302是含有GFP 报告基因的，不过好像效果不好，。。不知道谁有pCAMBIA1302的载体？希望能够交换，谢谢啊！！我的 QQ是115635542

皮皮2008 发表于 2009-9-23 22:11

植物表达载体有pBI121 pBI221
我们实验室一个师姐以前构建过这个载体
把目的基因和GFP连在pBI121上
切掉了GUS
GFP在目的基因的下游

darlingziyu 发表于 2009-9-23 22:59

pCAMBIA1302中的gfp是mgfp。mgfp消除了GFP基因中的隐蔽性内含子，可以避免植物细胞的错误剪接。但是mgfp在改变了碱基成分后，荧光强度会变弱。
好像现在用的gfp一般都是egfp，增强了荧光强度的。
08年的诺贝尔化学奖就是发给了钱永健等三个人，以表彰他们在发现和推广gfp中做出的贡献，楼主可以关注一下哦。
[b] [url=http://www./bbs/redirect.php?goto=findpost&pid=225787&ptid=25775]6#[/url] [i]buliang84[/i] [/b]

buliang84 发表于 2009-9-24 20:29

[b] [url=http://www./bbs/redirect.php?goto=findpost&pid=225858&ptid=25775]8#[/url] [i]darlingziyu[/i] [/b]

:loveliness: 万分感谢！！！我多看些文献。。。

buliang84 发表于 2009-9-25 19:59

螺友们 能不能给出具体是哪一种表达载体更适合植物基因亚细胞定位呀？？最近一直苦于 没有表达载体  无法后续工作:'(

wen0891 发表于 2009-9-27 23:10

双子叶用pBI121，pBI221，当然要自己把GFP连上去
单子叶就pCAMBIA系列 ，我们用3301，pGA1611应该也可以
主要是启动子不同，当然用拟南芥很简单了，玉米就很难了。

xuexiuhua 发表于 2009-9-28 22:48

我们实验室一般用pBI121，pCAMBIA1300和pCAMBIA1305
主要在拟南芥植株里做亚细胞定位