甲状腺激素制作SD雄性大鼠肾阴虚证动物模型的研究

广州中医药大学 硕士学位论文 甲状腺激素制作SD雄性大鼠肾阴虚证动物模型的研究 姓名:罗益 申请学位级别:硕士 专业:中西医结合基础 指导教师:邹移海;王萧 20060401 中文摘要 一、舀鹃: 本谍题的目的在于探索甲状腺激素导致肾阴虚证动物模型的规范造模方法， 丽时提供一个初步的肾弱虚证动物模裂评价标准，为中暖证候动物模型规范化研 究提供参考。 =、方法: 1.理论研究:肾掰廉诞动物模型评价指掭选择 1.1通过查阅资料总结出临床肾阴虚证诊断标准及客观指标研究成果，包 括症状体征和客观评价指掠。 1.2根据i|笛床诊断标准和评价指标初步拟定肾阴虑证动物模型评价指标。 2.实验磷究(分以下四步进行) 2.1实验一:初步筛选甲状腺素导致舞阴纛证大鼠摸型的规范化遗模方法。 本实验选择SPF级雄性sD大鼠，根据文献记载的最常用剂量设计出三个荆 爨:25mg/kgbw、12.5mg/kgbw、6.25mg/kgbw造模，分别在造模后第14天、2l 天、28天连续采斑，蕊察各齐《纛组动物血渗皮质醇(Cort)、睾酮(T)、雌二醇 (&)、甲状腺索T。和L、环磷酸腺菅(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)等各项指标随剂 量、时间的变化，与空自对照维佟对照，确定用药荆最和给药时间，筛选出较为 规范的造模方法。 2.2实验二:初步筛选甲状腺素加利赢平制作背阴康涯大鼠模型舱方法。 本实验选择SPF级攘性朝大鼠，搬据文麸记载的最常闵翔量设计出三个剂 罴级:甲状腺素37.5mg/kgbw、剩血平0.25mg/kgbw;甲状腺素75mg/kgbw、利 血平0.5mg/kgbw;甲状腺素150mg/kgbw、利血平1.Omg/kgbw造模，分别在遥 模后第6天、10天、14天连续采血，观察各剂量组动物盥清皮质醇(Cort)、睾 羽(T)、雌二酵(E2)、甲狄腺索奠和孔、环磷酸腺蔷(cAMP)、环磷酸鸟萤(cG挣) 等备项指标随剂量、时闯的变化，与空白对照组作对照，确定用药剂慧和给药 时间，筛选患较为规范的造模方法。 2.3实验三:甲状腺激素造模法对雄性SD大鼠疫状及其它指标的影响 按实验一实验二筛选出的造模方法造模，在造模过程中对动物进行一般情况 的观察，并进行耐力耐寒试验、抓取激惹试验、隔离攻击试验、旷场试验、母鼠 怀孕率等试验，与空白对照缀作对照。通过对疲状的科学观察，补充前猫两个实 验客观指标捡狈l的不足，并进一步完善肾阴虚证动物模型症状诊断评价体系。 2.4实验四:六味地黄汤的药物反证 大鼠分为模型组、六昧她黄汤组和空白对照组。模型组和六味地黄汤组均 按实验一实验二筛选战的方法造模，六味地黄汤组造模同时灌服六昧地黄汤， 空白对照组灌服生理盐冰，在造模过程中对动物进行一般情况躲双察，并进行 耐力耐寒试验、抓取激惹试验、隔离攻击试验、旷场试验、母鼠怀孕率等试验， 与空自对照缀作对照。成模后处死所肖大鼠，取材脏器称重、送检病理。 互、结果 1.实验一:用甲状腺素水溶液以12.5mg/kgbw蛉赉J量灌胃，连续2l天，犬鼠的 赢渍Cort、T、E2、T。、T4，疯浆cAMP、c61ffP及脏器瘸理等多项指标符合鹜阴虚 的病理变化。初步确定甲状腺素致臀阴虞证大鼠模型的用药剂量为 12。5mg/kgbw，造模对闯为2l天。 2.实验二:用甲状腺素水溶液75mg/kgbw和幂l血平0.5mg/kgbw灌胃，连续lO 天，大鼠的血清Cort、T、E2、T。、T。，血浆cAMP、c6MP及胶器病瑗等多项指橼 符合肾阴虚的病理交化。初步确定甲状腺索秀n利血平致肾阴虚证大鼠模型的用药 剂量为甲状腺索75mg/kgbw、利血平0.5mg/kgbw，造摸时闻为lO天。 3.实验三:大鼠在造模过程中，逐渐&现消瘦，体重增长减慢，背都皮毛桔槁、 脱毛，感汗，饮水量增加，肛溢升高，大便千结等肾阴虚诞的症状特髹。大鼠低 温游泳平均死亡时间、6分钟内大鼠所爬过的格予数和负荷活动能力都低于空白 对照维(p＜0。05)，生殖能力较空囱对照缀大鼠也有照著减退(p＜0.05，P＜ 0.01)。综合以上结果，进一步表明该模型符合背阴虚证的症状特点。 4.实验因:六昧地黄汤组大鼠一般状况与模型缎大鼠相￡E有根本性豹好转，黢器 也基本派常，表明六味璁黄汤对模型大鼠形成肾阴虑的病爨状态有一定豹阻断， 即六味地黄汤对应用甲状躲激素的大鼠模型有一定的预防治疗作用。 四、结论 1.甲状膝素致肾阴虚诞雄性大鼠模型的造模方法:SPF级SD大鼠，雄性，体重 200--240克，每天灌霭甲状腺索水溶液12.5mg/kgbw，连续21天。 2.甲状腺索加利点平致努阴虚证雄性大鼠模型的造模方法:SPF级SD大鼠，雄 性，体重200一240克，按甲状腺索75mg/kgbw/天，利赢平0.5mg/kgbw/天联合 灌胃，连续给药lO天。 关键词:肾阴虚 sD大鼠 甲状腺索 利血平 Ⅱ Researchof MakingKidney-yinDeficiency Modelin SD RatwithThyroid Speciality:combineofTCMwithWesternmedicine Author:Luoj『i Tutor:Prof.Zou，Yihai Abstract Objective: The objective ofthis paper isto quest forthenormativemethodof buildingKidney-yindeficiencyratmodelwith thyroid，and to provide a first step standardof model evaluationas well，which canoffer convenienceforthestudyofChinesemedicine，andsupplyreferencesto standardizationworkofanimalmodeloftraditionalChinesemedicine. Method: 1.theoreticalresearch:Tochooseevaluationindexof Kidney-yin deficiency animalmodel。 1.1 Totallyupclinicaldiagnostic standardand objective indexof Kidney-yindeficiencysyndromebyconsultingcorrelativeliteratures， including thesymptomandtheobjectiveevaluationindex. 1.2 Todraw-up thefirst step evaluationindexofKidney-yin deficiencyanimalmodelonthebaseOftheaboveresearch results. 2.experimental research: 2.1 experiment I:Toselectpreferablemethodof makingKidney-yin deficiency modelinmaleSDratwithThyroxine Inthisexperiment，choseSPFmaleSD rat，200-2409，useddosages accordingto the following:6.25mg/kg，12。5mg/kg，25mg/kg，collected bloodon14th，21th，28threspectively，thentestthenumericalvalueof Cort，T，E2，T3，T4，cAMP，cGMPintheblood，andcompared withtheblank group inordertoselect preferabledosage andtimeconsequently. 2.2 experiment II:Toselectpreferablemethodof makingKidney-yin deficiency modelinrealeSDratwith Thyroxine andReserpine Inthis experiment，chose SPFmaleSDrat，200-2409，useddosages accordingto the following:6。25mg/kg，12.5mg/kg，25mg/kg，collected bloodon6th，lOth，14threspectively，thentestthenumericalvalueof Cort，T，E2，T3，T4，c触譬，cGMP intheblood，andcompared withthe blank groupinordertoselectpreferabledosageandtimeconsequently. 2。3experimentM:ToobservethecardinalsymptomaffectedbyThyroid Inthisexperiment，madeKidney-yindeficiency ratmodelwhichhad establishedintheexperimentiandexperimentII.observingthegeneral response affected byThyroid atthesametime.A1ltheratsweretested coldendurancecapacity，provokeddegreebysnatching，rundistance， autonomic activity，genito-function(male)，etc。Results wouldbecompared with theblank group.Through the symptoms observed supplement the objective indexofexperimentIandexperimentII，andmodifythesymptoms system of Kidney-yindeficiency ratmodelfarther， 2.4 experiment IV:Toobserve the curative effect treated by LiuweidihuangWan。 Theratswere dividedinto three groupsrandomly:modelgroup， Liuweidihuang Wan group andblank group。ModelgroupandLiuweidihuang Wangroup weretooksolutionas before，andorganicpathology，while each 糙uweidihuangWan group’s rats were treatedby LiuweidihuangWan solution4。5mleverydayinthesametime，theblankgrouptooksaline. During thecourseof experiment，we will observethe show of every group，likecoldendurancecapacity，provokeddegreebysnatching，run distance，autonomicactivity，genito-function(male)，etc.Alltherats wouldbe killedtodetect organicpathology whenmodel group’s rats showedthe symptoms of kidney-yindeficiency. Results: 1.experiment l:UsingThyroxine solution feedingrats，12.5mg/kg。hw perdayfor21days，rats’Cort，T，E2，T3，T4，cAMPJ cG挣，andorganic pathology resultsaccordantwith pathological changes ofKidney-yin Deficiency.EstablishthedosageandtimeofmakingKidney-yindeficiency ratmodelwould be:Thyroxinesolution，12。5mg/kg.bw，21days. 2.experimentII:FeedingratswithThyronxinesolution75mg/kg.bw andReserpine 0。5 mg/kg.bwperday for10 days，rats’Cort，T，&，%， T4，cKY!P，cGMP，andorganicpathology resultsaccordantwith pathological changesofKidney-yindeficiency。Establishthedosageandtimeof making Kidney-yindeficiency ratmodelwould be:Thyronxine solution75mg/kg.bw IV andReserpine0.5mg/kg.bwlO days. 3.experimentHI:MakingtheKidney-yindeficiencyratmodelbythe way establishedin experiment Iandexperiment lI.During the process. ratsgraduallylosingweight，becomeemaciated，depilation，coat become witheredand yellow，and behavesome symptoresuch asfizzandfrightened. Theaverage timeof swimming incold water，theabilityofautonomicand burdenedactivityarelowerthanblankgroup，thegenito-function(male) are greatly decreased too.Liuweidihuang Wan group’s rats have recuperatedaftertreatedbyLiuweidihuangWan.Thenumericalvalueon T/E2，T4，cAMP/cGMPwere improved thanmodel group’s(P＜0.05)，T3 and organic pathologyresultshas showed the trendof enhanced.Thus， LiuweidihuangWanismedicableforKidney-yindeficiency. 4.experimentIV:LiuweidihuangWangroup’sratshaverecuperated aftertreated byLiuweidihuang Wan.Thenumericalvalueon average time ofswimmingincoldwater，theabilityofautonomicactivityandthe genito-functionwereimprovedthanmodelgroup’s(p＜0.05)，andorganic pathology resultshasshowedthetrendofenhanced.Thus，Liuweidihuang Wanismedicablefor Kidney-yindeficiency. Conclusion: ThepreferablemethodofmakingKidney-yindeficiencyratModelwith Thyronxine is:SPFmaleSD rat，weight200-2409，fedThyronxine solUtion 12.5mg/kg.bwperdayfor21dayscouldbeusedasKidney-yinDeficiency animalmodel. The preferable methodof makingKidney-“yindeficiency ratModelwith ThyronxineandReserpine is:SPFmaleSD rat，weight200-2409，fed Thyronxine solution 75mg/kg.bw and Reserpine 0.5 mg/kg.bwperday for lOdayscouldbeusedasKidney-yinDeficiencyanimalmodel. Keywords:K{dney-YinDefioiency:rat:Thyfoxine;Reserpine V 附: 广搠串缓药犬学攀位论文藤错毪声鞴 零人辩霪声翳; 掰墨交熬擎波淦交，楚个天在导努翁撩嚣下，教盎避抒磁 究工作掰取德的成隳。除文中殖缀特剐加以注嘴芍{用的内容外，本论文誉含任何 其缝个入戏集体已经淡表或撰写趱的襻品成聚。对奉文豹醪}炎做蹬重要贡献戆个 天蠢集体，跨纛在交串蕊器舞方式稼爨烟羲嚣。本天完全淼谈餮|奉声臻黪法簿蘩 祟由本入承握。 学位论文作者签名 ?箩盏 嚣期: 垂g年参鼹詹霹 芙予学穰论文使黼授权靛声臻 举入竞袅了觯广州中医药大学蠢关傺鐾使鲻攀健论文瓣燃定，霆意学梭保露 或蠹黧家毒荚零}:瓿梅送交论文黥复露终释藏予敝，，惫译鼗焱溪帮赣麓。零太授 权广州中医药大学埘以将本学位论文豹全部躐部分肉容编入有关数据库谶行检 索，W以采用影印、缩印或其德鬣帮手段保存秘汇绽本学俊论文。 (像密逮交京瓣密嚣庭遵守瓣艇霆≥ 论文作者籍名』渔论文学嬲熊毫差鼙垒袅蜘 鞋鬟: #参每多冀瞳嚣 引言 中医学侮为东方文化豹瑰宝，其防病治病的嶷著疗效赢得了长久普遍的赞 誉。从前人“酉病皆生于肾”和今人“各种疾病当矛盾处于这样一个肾虑阶段， 就有可能透过补肾达到扭转瘸机的作用，也蠢并无鹭虚，由予中西医结合盯理论 指导，采用毒b瞥调熬阴阳，从两提高疗效”等这些说法，不难想见，对中医来说， 肾纛诞是临床常见的脏臆虑诞，补籍疗法、补肾方药临床应用相当广泛。 随着社会医疗保健要求秘疾病谱的交化，对中医学提出了更高的要求。为 了探究中医学的奥妙，揭示辨证论治的基本规律，切实提高中医临床疗效，人们 针对肾证展开了多方面研究。有的从中医传统理论的角度，透过文献整理，发掘 总结古今嚣家豹ll鑫证经验，商爨I丑学，启发新知，将瞥证证治作一全藤系统豹归 纳，在继承发扬中使之提高，这无疑是一项极有意义的工作;避30年来，上海 第一医学院藏象专题组运用现代科学方法，对中医的肾，作了深入研究，取得了 很大成绩，开拓了中医研究悔的耨境，以此为契机，中西医缩会人士大力开展肾 证动物模型研究，其研究成果，对瘟发人们思路，指导校床实践，促进中露医结 合的发展，具有十分熏要的意义。 从中医学的历史发展来看，被中医界率为经典的《黄帝内经》，其形成和发 展的过程巾，出于认识入类生命现象的需要，就广泛涉及到了蓊学i，心理学、天 文学、生物学、病理学、治疗学等等多学科的知识，它们对《黄帝内经》的形威 和发展起了熏要作用。科学豹生命在予创新，中医学只有在不断的学科交融、多 角度的探索中才能进步。 今天我们将动物实验方法弓l入传统中医药学的研究领域，戮整体双念及翔 诞论治思想为指导，运用藏象学说和病因瘫梳理论，把人类疾病的某些特征在截 物身上加以模拟，靠9作中医诞候动物模型，再现中医学人体诞候。这样的动物囊 验研究可使中医学从宏双、定性、抽象研究逐渐向微观、定量、其体研究渗透， 对于探索中医“证”的本质，阐明中医方裁对“证”能治疗作耀机制具有熏要意 义。特剐是中医诞候与正常体质之闷是一种渐变关系，以全身性、慢性、机能性 改变为主，如脾虚、肾虚、囊瘀、痰漫等，这些证候与现代医学疾病概念之阔确 很强的互补性和可组合性，这些组合往往反映疾病的本质。通过动物模型来研寅 这些组会熊够加深对人的疾瘸瘸理的认识，从丽提高治疗水平，因此探索如何在 造模上体现中医特点携动物证候模型具有重要意义，其必将为中医学的发展起蛰 良好的推动作用。 VI珏 甲状腺激素制作SD雄性大鼠肾疆虚证动物模型的研究 第一部分 理论研究 一、蟹阴虚证豹历史沿革 肾阴虚，是中隰病理学的重要内容，多由禀斌不足，肾阴素亏;或久病伤阴，波 及肾阴;或情志内伤，五志过极，化火伤阴;或邪热久羁，损伤瞥阴;或失血耗液， 过服拄阳温燥之品，耗伤肾阴;或房劳过度，暗耗肾阴所致。从春秋战弱至明清时期， 历代医家从不同侧面论述隧发，极大地丰富了中医学内涵，指导临床辨证和治疗。研 究历代肾阴虚辨诞论治豹概况，可以提高对肾阴痊诞治理论的认识。有了正确的理论 指导，才能较准确遮复制肾阴康动物摸型。 1.周秦时期 《黄帝内经》成书予这一时期，其对肾瓣生理作用、特性和病证等的有荚论述奠 定了肾阴虚狂治认识的基础。厨世将之总缭为肾的作用:有肾主藏精，藏志，出伎巧， 主骨生髓，道于脑，主生长发育衰老过程，其华在发，主耳，开窍于二胡，合三焦膀 胱;背的特槛有瞥恶燥，阴常虚，精易耗，火宸藏。书中并朱提及褥阴的概念，也未 出现肾阴虚病证的具体治法和方药，但其在《素闷? 通评虚实论》中给虚证下了一个 十分概括的定义“糙气夺剡虚”，并对“精气夺则虎”，寻致“五纛死”的临床表现进 行了具体摈述:“脉细，皮寒，气少，泄稠前雁，饮食不入，此谓五虚。”。治疗方面， 《内经》针对瘸枫特点总结出“虚者补之”，“糖不足者，补之以昧，形不足者，补之 以气”。《难经》仓4赢五损之说“一损损于皮亳，皮聚面毛脱……五损损于臀，骨瘘不 能起于床”，并在《内经》理论的基础上，进一步提出纛膝廉损的治法:“损其脯者， 菔其气……损其褥者，益其精。” 2.两汉时期 肾阴虚辨证是八缨辨证和脏臆辨证的结合，这一时翳基本确立肾阴虚辨证规范。 东汉? 张仲景的《伤寒杂瘸论》，已经具体运用八纲对疾病进行辨证谂治，方隅在《医 林绳聚》中有这样一段评论“仲景治伤寒，着三酉九十七法，一西十三方，……然究 其大要，无蹴乎表里壁实阴阳寒热，八者丽已”。仲景在继承《内经》中医理论的基 础上，结含躲床实践，创造性地将病、证、治同论，并通过条文的形式把理、法、方、 药有机地贺穿起来，确立了肉伤病以脏腑病桃立论进行辨证的方法。《中藏经》是这 一时期的又一著作，相传为华佗所萋，书中有对肾获康症候表现的论述，“肾生病， 剜口热莒干，咽肿，上气，嗌干及心烦谣痛，羹疸，痿厥，鞭脊背急痛，嗜馨，足下 热i珂痛;病久不飘，则腿瘸，小便闭，面两胁胀，支满，目盲者死。”并制有葛玄真 人百补构精丸以补肾虚。对五脏六腑的生理、病理、诊断、辨证治疗及预爱等均有较 全强的论述。 广州中医药大学2006届颈士学位论文 3.隋唐宋元时期 这一时期众医家深纯了对肾阴虚辨证论治豹认识。隋? 巢元方等所著的《诸病源 候论》系统归纳了肾阴纛的瘫候，论述了虚热、虔损、遗泄等疾病与鹜阴不足的关系， 从症状学角度极大撼丰富和发展了对肾阴虚病证蛉认识。如“虚劳丽热者，是由于阴 气不足，阳气有余，故内外生予热，非邪气从外来乘也”，“夫蒸瘸有五，一瞬骨蒸， 其根在鬻，曼起体凉，团埔即热，烦躁，寝不能安，食无味，小便赤黄，忽忽烦乱， 缎喘无力，腰疼;两足逆冷，手心常热，蒸盛伤内，则变为疳，食人赢脏”，“邪气乘 于}埒则阴气廛，阴气虚剡梦交。肾藏精，今肾虚不憩制于精，故因梦丽泄”。庶? 王 冰祟《素问? 趸真要大论》“热之丽寒者取之阳，寒之面热者取之朝”，认识到阴虚之 热，非火之有余，乃真阴不足，当补阴以清热，提出“壮水之主，以翻阳光;益火之 源，以消阴翳”的治疗大法。腐? 孙思邈著《备急千金要方》，提蹴“心肾受邪，脏 臁俱瘸”和“母劳季}予”的观点，创立了很多以遥应瘥来命名的方剂，如“治肾虚寒， 腰脊苦瘸，阴阳微弱，耳鸣焦桔方:生地黄、囊天门冬、自蜜、苇肾、炙自术、麦益、 甘草、千姜、地骨皮、棱心、桂仲、黄苠、当归、五味予”，“治精极，五脏六腑俱损 康熟，遍身烦熟，督病烦}嚼方:黛地汁二升，麦冬汁、赤蜜各一升，竹沥一合，石膏 八两，人参、川芎、挂心、曾蕈、黄芩、麻黄备三两，当归酒两”。求? 钱乙从旗床 实际出发，针对dJL纯阳之体先天不足、精气未充及患病蘑翻糖易耗祷特点，提出“肾 主虚，无实”的观点，并创立了平补肾阴的地黄丸，即露世所称之六味地黄丸。朱丹 溪得导“相火论”，认为“阳常有余，阴常不足”，针对阴虚火旺创制大孙阴丸以滋阴 降火。 4。明清时期 这一时期医家们辩前人文献进行整理补充，完善了肾阴虚的辨证论治。张景岳在 《景蔷全书.虚损》中对肾阴盘作了比较详尽的论述，“肾水亏，则肝失所滋焉血燥生; 肾水亏，则水不归原耨脾痰起;肾水亏，则心肾不交两神色败;肾水亏，则盗伤肺气 丽嘴咳频;肾水亏，到孤阳无主两虚火炽”。对朱丹溪“阳常有余，阴常不足”作了 补充改进，倡导阴阳楣济，提出“阳非有余，阴亦苓是”，采用阴中求阳、阳中求阴 的原则制左归饮、左归丸以培真阴;右归饮、右归丸以补真阳，为后世所推崇。滂? 林 佩琴对肾阴斑的病理概念、相应的脉痉表现及舆体的治疗方药作了一个归纳，“凡腰 脊酸痿，绵绵作痛，并腿足酸软者，肾虚也”，“蟹阻纛者，脉洪丽数，虚火时炎，小 便黄赤，宜壮永之主”，“足跟痛，属肾阴虚者，胫熟跟痛，六味丸加肉棱、龟板”，“阴 虚者体赢，足心及股胫热病，左尺细数，或两尺数盛，虎潜丸去陈皮，加肉桂”。这 些病理概念和方药一直沿用至今。 5.鳃放后至今 清朝来年至解放前一段时阆，西医学传入中国，由予列强的文化侵路和当政者的 压制，中医的发腿处于一个绝对的低潮。解放后我国政府大力扶植中医，成立中医院 2 甲状腺激索制作SD雄性大鼠肾明虚证动物模型的研究 校，鼓励中医走科学发殷之路。一方藤通过文献整理，发掘总结古今医家的临诞经验， 商量旧学，启发新知，对肾阴虚有了更深一步的认识:《中医大辞典》ll】对肾胡纛的症 状作了详纲说明;《中医证候规范》嘲在收集大量文献资料的基础上，对肾阴虚的别名、. 诞候概念、诊断标准作了一个全面的归纳整理。另~方面以沈鑫尹为代表的中西医结: 合力量，镶们在传统中医理论的指导下，运用现代科学方法，对中医的肾，作了深夕够 研究，取得了很大的成绩，开拓了中医研究肾的耨境。沈氏对l驽本质研究作了一个阶 段总结，“肾阴度建以下丘脑一自主神经功能失调为主，同时也有体液改变:肾阳虚是 以下丘脑一内分泌功能减退为主，同时也有自主神经功能改交，弩虚时免疫功能的改 变是随着自主神经和内分泌功能的变化丽交亿”。翻后来者以这些研究成果为依据，进 行动物实验，建赢了缀多肾证动物模黧。1988年lO月中国病理生理学会中医病理生 理专业委员会在南昌露开“全国中医瘸证动物模黧复铡经验交流会”，1993年陈小野 嘲主编《实朋中医证候动物模型学》，由jE京医科大学、中国协和医科大学联合出版社 出舨，这一专著的临懒，标志着中医动物模型已经逐步形成一门独立的学科。 二、肾阴虚证动物模型研究豫况 1.肾阴虚诞动物模型造模方法 为了探讨中医“诞”的蜜质，揭示辨证论治的基本规律，切实提高中医簸床疗效， 二十世纪六十年代初，邝安堑等开创了中医动物模型的研究嘲，第一次将动物实验方、 法引入中医药学研究镁域，成为实现中罴药现代化新的突破口，很多鹜阴虚证动物造 模方法被研制出来，比较常见的有以下几种: 1。1甲状腺激素应用法[61 藏法理论依据是甲状腺桃能亢进患者存在基础代谢旺藏，簸床表现与中医肾阴皮 证相似。在众多造模方法中，甲状艨激素应用法较为常见，在所掌握的文献资料中， 该法占文献总数的60%。所用药物有印状腺索、甲状腺粉、三碘甲状腺原氨酸、左旋 甲状腺素、甲状豫索船利廒平等，其中叉以单用帮状豫素或带状腺索加剥盘平较为多 见。1997年上海中医学院芷常入体教研组首先建立用甲状腺素和列血平所致肾胡虚模 型，造成的模型动物火便干结，屎量减少，饮水量及饮食量增多，活动频度增加，汗 多，体滠升蒜，心率加快，症状表现较符合肾阴虚证的辨证诊断，瘸理方面与肾证实 质研究成果也颇为一致。本方法成为经典的肾阴虚造模法，被研究者广为采用，1986 每中国中医磷究院杨梅香采用本法建立甲状豫枫能亢进阴虚模型，对龟上下甲滋阴作 用进行比较研究，获得鞫家中医药管理局秘技进步奖。 1.2肾上腺皮瘊机能亢进肾阻藏漠型嘲 以动物肾土豫皮质功能改变模拟肾虚证是根据娲床肾上腺皮质机能亢避患嚣辨 证多属肾阴虚，以及临床因治疗需要长期大量使用皮质激素病人表现为肾阴虚面设计 的。具体方法有两魏:一种是给动物使用大量外源性皮质激素，形成岁}源性皮质激素 水平升高，利用激素的生理效麓复制出类似骛上腺皮质机能亢进模型i另一种是使用 3 广州中医药大学2006届硕士学位论文 促肾上腺皮震激素(ACT}{)，利用舰}l能促进肾主腺皮度激素的合成和释放，其中以 糖皮质类固醇为主，在人类主要产生皮质醇，可使肾上腺皮质激索的降解减慢，造成 肾上豫皮质机能亢进。对于本法所露4模型，其辩证尚有争议，有入认为激素应用期闻 为肾阳寝，因为此时肾上腺皮质轴受抑制;有人认为激素应用期闯为瞥阴虚，因为体 海有大量外源性激素:也有人认为激素应用期为阴虚，停翔后为阳虚。由于证候性质 的复杂难辨，使其应用受到了很大限制。 1.3小肠瘘肾阴虚模型H。’霹 此法由上海第二医院广慈医院创造，是羽用绘实验动物行人工造瘘术，造成箍位 小肠侧瘘露建立肾阴虚模型。成模后可见口渴欲饮，四肢无力，体温下降，苔红于瘦， 舌尖光莹，大便量少谣于，小便较少等类努阴虚痰状，僵由于手术过程及后果复杂， 同时动物模型伴意一定程度豹阳虚，故一般很少廒用。 l，4肾艏廉型S。。。肉瘸模型14’≈ 它是由解放军一八四医院蘸济民1979年创立的一穗诞病结会模型，方法是采用 雄憔小鼠，将S;。瘤种制成Ig/4ml生瑗盐水细塍悬液，每只0.2ml接种予右前肢腋 部皮下，次日超用甲状腺索120rag加利血平0.8mg/kgbw/天，灌喂五天。模型动物出 现消瘦，金身抖动，不吃食。由于本模黧主要用予癌瘸虚证的功能实质研究，放采用 者较少。 1.5肾阴虚熬高赢压模熬【4一羽 它是建变最早的一种证瘸结食模型。其理论依据主要是离瓤压病一般常表现有鹭 阴盔内热的证型，此模型用滋鹜阴方药饔效，用温学阳方药反丽加熏其病情。方法是 将造模动物的一侧肾动脉结藐或用银夹狭窄，另一肾切除。造模成功后，模型动物叔 羝升高，肾功熊显著降低，心脏重量援数增大。本模裁主要用于离赢压研究，并且模 型夹杂赢淤涯，较少用于瞥阴虚证豹研究。 1.6左旋谷氨酸单钠(MSG)模型唧 左旋谷氨酸革钠(蹒G)楚一种神经毒素，能特异性导致大鼠等动物下丘脑弓状 核(arcuatenucleus，ARc)毁坏。ARC是下丘脑耋要核园，广泛参与神经内分泌免疫 网络的调节。MSG犬鼠下庶膝一垂体一肾上腺(HPA)轴功能亢进，下膝脑单胺类递质多 巴胺、去甲肾上腺素含最显著降低，同时还鸯神疲乏力，爪甲枯燥，雄性犬鼠累丸萎 缩，雌性大鼠胡道迟开等肾纛瘕状，辨证符合肾阴虑。 1.7热性中药应用法斗搦 这是唯一符合传统中嚣病因的造模方法，理论依据是过量服用热性中药，可以造 成体内阴液耗损，形成阴虚肉热的病理改变。主要是用药性温热豹中药，如附予、肉 桂、仙茅、仙灵艟等煎成汤剂并进行浓缩霜灌喂实验动物，一般用药7灭可复制出肾 阴虚模型。 2.肾阴虚证动物模型客观谨价指标 4 甲状膝激素制作SD雄性大鼠肾胡康迁动物模型的研究 肾阴虚模型豹造模方法有很多，每一种造模方法都有相应的模型成立的判定标 准，客观指标多种多样，现揍取其中比较常见的分述予下: 2.1 cAMP、cGMP含量及比值 ; CA}/LP和cGMP是分子生物学中，具有广泛调节功能的化学物质，露者闽按一定眈 例结构协调一致。1975年，N.D。Gollberg提出生物控制的“阴阳学浇”，认为环磷酸 腺蕾(cA艟P)、环磷酸鸟营(cGbiP)是机体内两静对立的调节系统，可能是中医学理 论的物质基础。这一假说的提出，弓l起我国学者黔兴趣，不少人对cAMP、cGMP与中 医阴阳的关系进行了大量研究，结果发现阴虚证cAMP有升高趋势，雕cGMP有下降趋 势，cAMP/c酬P比值升高，这一结果为不少后来研究者所莺复∞圳。 2.2内分泌改交 在对肾阴虚证的研究中，高唱H2】以下丘脑一羲体一肾上腺轴的分泌功能交化为定量 指标，发现臀阴虚大鼠存在肾上腺皮质功能亢进;近年研究显示性腺辅功能低下和性 激素水平的交化与中医肾虚有关，肾虚越重，毪激素变化越显著，朱秀英等㈣报道肾 阴虚小鼠血浆雌二醇E。较正常组明显升高，两睾酮T含量明显低予正常组;下丘脑一 垂体一甲状腺轴方面，傅万由【l习研究发现肾阴廛犬鼠血清B、L较正常动物显著升离， 武文斌[143认为甲状腺素水平高低是阴虚、阳虚瘸变的物质基础之一，而脱碘酶活性是 阴虚、阳虚的关键，阴虚患者反三碘甲状腺原氨酸(rT。)较正常组高。 2.3免疫功能 虚证免疫功能均有下降。杜标炎H鄹发现肾阴廛造型小鼠免疫功能出现急尉改变， 免疫器宫膀腺、耱重量减轻，脾细胞IL_2活性降低。傅万出【l秘研究表明甲宄肾阴虚 大鼠血清迫G降低。桂常青H司和傅万由旧研究发现皮质激素诱发的肾阴虚小鼠吞噬 碳粒廓清指数咀摄低于正常组，抗体生成能力降低。 2.4微量元素 中医证的形成是人体内阴阳失衡的结果。现代以微量元素作指标，发现肾阴虚证 与微量元素阃的关系十分密切。在研究中人们发现，化学微量元素参与物质代谢过程， 对神经内分泌系统和免疫系统有影嫡:如锌是肾上腺皮质激素和胰岛素的圈有成份和 功能单位，与延长胰岛索作用有关，并大量存在于性腺及生殖器官孛;锌参与了酪氨 酸合成，阗接影嚼凡茶酚胺这种神经递质的形成;淋巴细胞豁鸯丝分裂依赖锌的存在， 如果缺锌，淤巴样组织就会萎缩，使细胞免疫和体液免疫异常。朱秀荚发现肾阻虚患 者铜含量明显高于正常对照组，Zn/Cu比傻下降u酊，复制肾阴虚小鼠模型也得到同样 的结果111]。 2。5自主神经、抗应激能力 桂常脊旺日和傅万由n铂羰道瞥阴虚小鼠耐缺氧时闽瞻显缩短，耐寒能力明显下降， 负重游泳时间缩短。傅万出嘲和曹永孝119]报道鹜阴虚动物痛瓣较正常者踢显降低。支ll 彦芳团掇道新生期大鼠给予左旋谷氨酸单钠(klSG)，成年后下丘脑单氨类递质中多巴 广螂中医药大学2006届硕士学位论文 胺、去甲肾上腺索等含量显著降低。 2.6脏器病理 傅万山Ⅱ3】发现甲亢型肾溺纛大鼠肾上腺皮质球状带细臆稍密集，厚度减少，束状 带外层单位面积细胞数减少:甲状腺重量减轻，与正常缀比较差异有高度显著性。高 唱嘲研究发现左旋谷氨酸单钠(MSG)所致肾髓盘大鼠，模型鼠大脑皮层、海马和下 最脑区大部分细胞呈DAB着染TUNEL阳性凋亡细胞，细胞核固缩，染色质形态各异。 吴坤显冽报道用甲状腺素加刹血平劁成的肾朝虚大鼠髯脏充血，肾小管交性。 2.7其健指标 任小巧瞰】发现胡虚大鼠血瀵过氧化脂质(LPO)和肝胆固醇含量升高，脂霞代谢 紊乱，自由基反应增强，与正常者比较有显鬻差异。蟊爱平f矧也报道弩弱痘大鼠过氧 化月鹭质(LPO)含量增加，三静抗氧化酶(GSH-Px、SOD、DID)均降低。傅万由H3】发 现阴虚大鼠血浆黏度较正常鼠明显增高，血糖降低。 兰、单状腺激素致努阴虑证动物模型研究概况 l甲状腺激素致肾阴虚模型成立的理论依据 1.1选用甲状艨激素作为造模药物符合鹜阴纛证的基零病理 甲状腺激素其基本作用是诱导新生蛋自质包括特殊酶系的合成，调节蛋白质、碳 水化台物和脂肪，以及水、盐和维生素豹代谢。甲状腺激素过量使用可致医源性甲亢 铡，甲亢褊床典型表现:急躁，哆嗦，怕热，多汗，日千多饮，多食，消瘦，心悸， 心啻有力;该药霹使动物兔疫系统功能低下，部分免疫器官出现病理敬炎;能造成下 丘脑一垂体一肾上艨轴、甲状腺轴、性腺轴不网程度的功能紊氖;使动物自主神经功 能出现紊乱，躁动，易激惹，出汗多，怕热;使物质代谢、能量代谢增强;符合临床瞥阴 虚{芷病理改交的结果。 1.2甲状腺激索致肾弱虚模型应用广泛且较为公认 制作鹜阴袭证动物模型方法比较多，如前历述，较常用的就有七大类。但是考虑 证候的单纯性，模型制作的箍、便、豢，人们更喜欢选用甲状腺激素肾阴虚模型。从 查阅的文献来番，应用甲状艨激素造模的占文献总数的60%。甲状腺激素肾阴虚模型 被卫生都药政局剖定颁布的《中药新药磷究指南》、李连达主编豹《中药新药萄效学 研究指南》、王j￡婴主编的《中药新药研制与申报》、孙敬方主编的《动物实验方法》、 陈小野主编的《实震中医证候动物模型学》、陈奇主编的《中药药理研究方法学》等 权威书籍收录。 1.3甲状腺激素模型在症状体征方面基本符合肾阴盛证的诊断 甲状腺激素造成的模型动物会出现被亳枯槁发黄及脱毛、消瘦、多动、易惊怕人， 心率加快、体温升高，饮水饮食量增瓣，大使千结等表现，其耐寒时闽、游泳存活时 闷缩短，自主活动能力减弱，性功宥%低下[13一矗19241，基本符合肾隰瞧{正的辨证诊断。 1.4用滋阴替肾方药的疗效可反证甲状腺激素模型 6 甲状腺激素制作SD雄性大鼠肾髓虚证动物模墼的研究 脊人用龟扳熟地等滋补肾阴药物及左魑丸或左归饮、六味地黄丸等滋阴补肾复方 可明显改善上述病交，遴~步说明了其肾阴虚诞候辨证的可靠性珏乐174堋。 2甲状腺激素制作蟹阴虚证动物模型存在的闯题 2.1制传方法不统一、不援范 甲状腺激素能造成弩阴廉证动物模型已被多数救内人士认可，但如何造成孥鞠袭 证郎具体的用药方法、用药时问却成为争论的焦点。主要有以下几点: ①药物不同。有甲状腺素、甲状腺粉、三碘甲状腺原氨酸、左旋甲状艨素等。它 们的临床作用及应用穗闾，区别在于吸收时闻、效用强度、半衰期等方西。 ②给药途径不同。主要有肌肉注射、皮下注射、灌胃三种。 ③实验动物静选择不同。主要脊Wistar大鼠、SD犬鼠、昆明种小鼠、CFW纯系 小鼠、ICR小鼠、豚鼠、新西兰兔。 ④用翁剂熏不同。主要有大鼠0.2mg/kg、0.5mg/kg、13.9mg/kg、15mg/kg、2.5mg/ 天/只;小鼠0.78mg/kg、1.0mg/kg、7.3mg/kg;兔1.0mg/kg、30mg/kg;豚鼠20mg/ 只/2天、40mg/只/2天、99mg/kg/天，其中用大鼠2.5mg/天/只和13.9mg/kg剡量的 占多数。 。 ⑤造模时间不同。竣短的只给药4天，最长的绘药35天，多数集中在7-28天。 2.2缺乏统一的模型评价体系 “。 动物模型的建立离不开评价指标的确定，理想的动物模黧应是规范化的，可以准 确重复雨现，每一种模型虽都特异地与背阴虚证某一方西或凡方遥的病瑗变化相联 系，但努羽虚证的实厦是一致的，应该有一个统一的评价标猴，才方便使用者选择运 用。僚现蜜情况是备用一种肾阴虚证造模方法，各定出一套评价指标，基本上是各自 为政，备实验者甚少有验证他人评价指标的。 戮、研究工作的弱的、涉及范围 应用带状脓激素制作肾阴虚诞动物模型是发骥较早盈目前较为公认的一种。该法 根据惯床甲亢病人罴现瞬上腺皮质功能亢进表现为背阴虚证丽设计的瀚。甲状腺激素 致肾阴度诞动物模型在癜状表现、病理改交方面?较好地符合临床蟹阴虚证豹辨证诊 断和病理诊断雨成为应用最广泛的肾阴虚证遗模方法。但在所掌握的资料中，该法造 模在给药途径(灌胃、皮下注射、肌肉注射)、用药剂量(从0.2mg/kg至320mg/kg 不等)、造模时闽(4天至35天不等)、使用动物(大鼠、小鼠、兔予、豚鼠)上存在