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风湿性疾病常用的诊断性实验室检查
自身抗体是指针对自身细胞内、细胞表面及细胞外抗原成分的免疫球蛋白。病理性自身抗体的产生在风湿性疾病的发生发展中具有重要作用,是风湿病发病机制及诊断、预后判断的重要指标。
检测自身抗体的方法有很多种，包括 间接免疫荧光法、颗粒凝集法、酶联免疫吸附试验、放射免疫法、免疫双扩散法、参比对流免疫电泳法、免疫印迹法、免疫斑点法、胶体金标斑点免疫渗滤法等。间接免疫荧光法适用于检测针对原位成分，也适用于可溶性成分的抗体，其余各法均适用于针对可溶性成分的抗体。
1. 红细胞沉降率
红细胞沉降率(Erythrocyte Sedimentation Rate ,ESR)简称血沉，是将血液加抗凝剂后置于试管并使垂直竖立1小时的红细胞下沉的距离(mm)。血沉是间接反映纤维蛋白原等急性时相反应物质浓度以及免疫球蛋白水平的指标，血浆中存在较多的不对称的大分子物质如纤维蛋白原、球蛋白等，可促使红细胞形成缗钱状，从而加速红细胞的沉降。常用的血沉测定方法为魏氏法(Westergren). 其正常值为：男性0～15mm／h，女性0～20mm／h。 造成血沉测定结果增高的非炎症或组织损伤性因素包括严重贫血、高丙种球蛋白血症、月经期、妊娠期、老年人等，一般血沉随年龄增长而增快，女性高于男性。
血沉升高对各种疾病的诊断并无特异性，但是可以反映炎症或组织损伤的存在。而且其升高程度与炎症、组织损伤程度相关，因此血沉是测定各种风湿性疾病和炎症性疾病活动的最简单而又重要的检测手段。
2. C-反应蛋白
C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)是一种典型的急性时相反应物质的蛋白质，是由5个相同的多肽链亚单位，非共价结合为环状对称多聚体，因能与某些肺炎球菌细胞壁的C粘多糖起沉淀反应而得名。免疫扩散、放射免疫、比浊度法以及酶联免疫吸附测定(ELISA)法均为实用的定量测定CRP的方法。
成年健康人血清中含量甚微，约0.8～8mg／L(免疫扩散或比浊度法)，但在炎症、急性心肌梗死、创伤、细菌感染、外科手术、肿瘤浸润时可迅速、显着地增高，一般在组织损伤后4小时内即开始上升，24～72小时急剧升至正常水平的百倍甚至千倍，病变消退或缓解后，CRP又可迅速下降直至正常。CRP上升的速度、幅度及持续时间与病情和组织损伤的严重程度密切相关。SLE合并细菌感染、患者有急性浆膜炎或慢性滑膜炎时，CRP浓度可显着升高。CRP可以作为判断RA疾病活动性、治疗疗效的一种客观指标。此外，CRP对于鉴别细菌性与病毒性炎症也具有一定参考价值．前者呈强阳性，后者多为阴性。
3. 抗“O”（ASO）
抗链球菌溶血素“O”(Anti-Streptolysin O，ASO)是由 A组链球菌产生的两种溶血性外毒素之一，可以溶解人红细胞，具有很强的抗原性。机体因咽炎、扁桃体炎、猩红热、丹毒、脓皮病、风湿热等感染A组链球菌后，可产生链球菌溶血素O抗体，即“ASO”。 其存在及含量可反映感染的严重程度。目前常用为快速乳胶凝集试验，正常值<200IU/ml。
A组链球菌感染后1周，ASO即开始升高，4～6周可达高峰，并能持续数月，当感染减退时，ASO值下降并在6个月内回到正常值，如果ASO滴度不下降，提示可能存在复发性感染或慢性感染。多次测定，抗体效价逐渐升高对诊断有重要意义，抗体效价逐渐下降，说明病情缓解。风湿热、急性肾小球肾炎、结节性红斑、猩红热、急性扁桃体炎等ASO明显升高。少数肝炎、结缔组织病、结核病及多发性骨髓瘤病人亦可使ASO增高。除了急性阶段外，类风湿关节炎患者的血清中通常检测不到ASO值的升高。在肾病综合征和抗体缺乏综合征患者的血清中仅有极低含量的ASO。
4. 补体
补体是是存在于人或脊椎动物血清与组织液中的一组不耐热的、经活化后具有酶活性的蛋白质，包括30余种可溶性蛋白和膜结合蛋白，在免疫反应和炎症反应中具有重要作用。
检测血清中总补体活性或单一补体成份含量的变化对于有关疾病的诊断和疗效观察都具有一定的临床意义。目前检测总补体活性采用50％溶血实验法(CH50)，C3，C4测定采用比浊度法。由于补体是新鲜血清中具有酶活性的蛋白质，其活性不甚稳定，为保持其完整功能，实验时应采用新鲜取样的血清标本以确保实验结果的可靠性。
与低补体血症有关的自身免疫性风湿病主要是SLE，尤其是活动性狼疮性肾炎、中枢神经型狼疮等，以CH50以及C3水平最为敏感，病情控制后补体可逐步回复到正常水平。其它与低补体血症有关的疾病还有链球菌感染后的肾小球肾炎和膜增殖性肾小球肾炎以及感染性疾病，如亚急性细菌性心内膜炎、细菌性脓毒症(肺炎球菌，革兰氏阴性菌)、病毒血症(尤其是乙型肝炎)、寄生虫感染等。
5. 免疫球蛋白
免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）是一组具有抗体活性或者化学结构上与抗体相似的蛋白质，主要存在于生物体血液、组织液和外分泌液中，是检查机体体液免疫功能的一项重要指标。人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白（γ-球蛋白）中，可分为五类，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。其中IgG是最主要的免疫球蛋白，约占人血清免疫球蛋白总量的80%，IgD和IgE含量很低，故我们常规所测定的Ig主要为lgG、lgA、IgM三项。
血清中免疫球蛋白异常，主要可分为三类： (1)几种不同的Ig水平增加：主要见于感染、肿瘤、自身免疫病、慢性活动性肝炎、肝硬化及淋巴瘤等。自身免疫病中，如系统性红斑狼疮(SLE)以lgG、lgA、IgM升高多见，类风湿关节炎以IgG、IgM升高多见。
6. 类风湿因子（RF）
类风湿因子( rheumatoid factor，RF)是抗血清IgG分子Fc片段上抗原决定簇的一种自身抗体，RF包括IgM、IgG、IgA、IgE型，其中IgM-RF是RF主要类型，也是临床上常规开展检测的RF。IgM-RF的常用检测方法是半定量的乳胶凝集试验，一般认为RF滴度>1:80～1;160具有临床意义。目前许多实验室已开展应用比浊度法或ELISA法定量检测IgM-RF，前者的正常值为<20iu< font="">／ml。IgG-RF、IgA-RF也可通过ELISA方法或放免法来检测。
RF是诊断RA的重要血清学依据之一，标准的乳胶凝集试验在约80％～85％的成人RA中可检出IgM-RF，是诊断类风湿关节炎的重要血清学标准之一。但是，正常人尤其是老年人(>5％)也可以RF呈阳性，而且随年龄的增长RF阳性率可增高，此外，各种慢性免疫刺激均可导致RF的产生，所以RF对RA的诊断特异性不高。RF可在下面多种疾病中检出：
①自身免疫病：干燥综合征(SS)、系统性红斑狼疮（SLE）、系统性硬化(SSc)、多发性肌炎/皮肌炎(PM／DM)和混合性结缔组织病(MCTD)等。
②感染性疾病：传染性肝炎、结核、细菌性心内膜炎、麻风和血吸虫病。
③非感染性疾病：弥漫性肺间质纤维化、肝硬化、慢性活动性肝炎、结节病和巨球蛋白血症等。
7. 抗环瓜氨酸多肽抗体(抗CCP)
抗环瓜氨酸多肽抗体( anticyclic peptide containing citrullin, Anti-CCP)：是环状聚丝蛋白的多肽片段，以IgG型为主的抗体。抗CCP抗体是由RA患者B 细胞自发分泌的,而其他疾病患者和正常人群B 细胞并不自发分泌抗CCP抗体。因此，抗CCP 抗体对RA具有较高的特异性。其敏感性 76 % ,特异性 96 %。
抗CCP 抗体检测的主要临床意义在于:①对类风湿关节炎诊断的特异性高（90.4%~98%）;②有助于类风湿关节炎的早期诊断;③可能与类风湿关节炎的活动性相关;④已有多数研究提示，其阳性与骨侵蚀程度相关，提示RA预后不良。
抗角蛋白抗体(antikeratin antibody,AKA)是以大鼠食管上皮为底物，用间接免疫荧光法检测到的一种抗体。AKA分为角质层型、弥漫型、棘细胞层型。其中角质层型AKA对类风湿关节炎诊断有特异性。其对类风湿关节炎患者的诊断的特异性为94% ,而其敏感性为47% 。AKA与类风湿关节炎的活动及严重程度有关，是类风湿关节炎早期诊断和判断预后的指标之一。
8. 抗RA33抗体
抗RA33抗体是针对Hela细胞或小鼠腹水细胞中提取的、分子量33KDa的核酸蛋白的抗体,以IgG为主。RA33抗体敏感性为17.50 %，特异性为84.55 %，抗体可出现在不典型的早期RA 患者，有利于类风湿关节炎的早期诊断。
9. 抗核周因子(APF)
抗核周因子( antiperinuclear factor, APF) :是抗人颊粘膜上皮细胞核周颗粒的自身抗体。APF在RA患者中的敏感性为52% ，特异性为79%，可以出现在RA 的早期阶段，大约30%的RF阴性的RA患者可以检出，是早期诊断RA 的有效指标之一。APF分IgG-APF、IgM-APF、IgA-APF等三种类型，IgG-APF为三种APF 中敏感性和特异性最高的指标。APF阳性而RF因子隐形的类风湿关节炎患者往往预后差。APF还与类风湿关节炎的活动性相关。
10. 抗Sa 抗体(Anti-Sa)
抗Sa 抗体(Anti-Sa)是针对Sa抗原的抗体。Sa抗原是存在于人体的正常组织如脾和胎盘及RA患者的滑膜血管翳中、分子量为50KDa和55KDa的非酰基多肽，不属于可提取核抗原，不与现有的可提取核抗原发生交叉反应。在RA 患者的关节滑液中可检测到较高浓度的抗Sa 抗体。在RA患者的血清中有20%～47%的检出率。抗Sa抗体可用于类风湿关节炎的早期诊断，其滴度与疾病的活动性相关。
11. 抗Ⅱ型胶原抗体
抗Ⅱ型胶原抗体(anticollagen type Ⅱ): Ⅱ型胶原是关节软骨的主要成分, 63 %的RA 患者的天然Ⅱ型胶原抗体,以IgG型抗体为主。30-42％的类风湿关节炎患者血清中可以检测出此抗体，Ⅱ型胶原抗体对于RA 的诊断特异性可达97% ,且在早期类风湿患者中的阳性率高于晚期的RA 患者,而且有助于RA的早期诊断。
12. 抗核抗体(ANA)
抗核抗体（ANA）是针对细胞核内的DNA、RNA、碱性组蛋白、非组蛋白、磷脂等各种具有抗原性的蛋白质分子及其这些物质的分子复合物的一组自身抗体的总称。ANA荧光类型大致有五种：均质型、核膜型、斑点型、核仁型和着丝点型。
按照细胞内分子的理化特性核分布部位，可将ANA分为五大类：①抗DNA抗体：抗单链(ss)-DNA抗体抗双链(ds)-DNA抗体和抗左旋-DNA抗体。②抗组蛋白抗体：抗总组蛋白抗体(AHA)抗亚单位抗体（H1、H
13. 抗DNA抗体
抗双链DNA（ds-DNA）抗体是针对其中双链DNA的一种自身抗体。抗ds-DNA抗体可视为系统性红斑狼疮的标志性抗体，且与疾病活动度，特别是与活动性狼疮肾炎密切相关。抗单链DNA（ssDNA）抗体见于多种风湿性疾病，包括系统性红斑狼疮、炎症性疾病、慢性活动性肝炎、药物性狼疮和硬皮病等。
14. 抗ENA抗体
抗ENA（extractacble nuclear antigen）抗体：是针对细胞内多种可提取性抗原的自身抗体的总称，是抗小分子细胞核核糖核蛋白（snRNPs）和小分子细胞浆核糖核蛋白（scRNPs）的自身抗体，不含组蛋白，与疾病的严重程度和活动性无明显相关。主要有七种：抗nRNP抗体、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、抗Scl-70抗体、抗Jo-1抗体、抗rRNP抗体。
（1）抗核RNP抗体 抗核RNP （nuclearRNP,nRNP）抗体是诊断混合性结缔组织病（MCTD）的重要血清学依据，因其抗原为含有U1RNA 的核蛋白复合物，故而称为U1RNP。其在MCTD患者的阳性检出率可高达95％，无论在疾病的活动期或是缓解期，高滴度的抗RNP 抗体均可持续存在。在其他自身免疫性疾病中阳性率低且滴度低。由于Sm和RNP是同一分子复合物（RNA－蛋白质颗粒）中的不同抗原位点，两种抗原具有相关性，故抗Sm抗体阳性常伴有抗RNP 抗体阳性，单一的抗Sm抗体或抗RNP抗体阳性较少见。抗U1RNP抗体阳性的病人，常有双手肿胀、雷诺现象、肌炎和指（趾）端硬化。
（2）抗Sm抗体 抗原是核内小核糖体蛋白，具有抗原性的蛋白的分子量是29KDa, 28KDa, 16KDa. 抗Sm抗体是SLE 的血清标志抗体，其阳性率约30％～40％。相对于抗ds-D N A抗体而言，抗Sm抗体水平不与SLE 疾病的活动性相关，亦不与SLE 的任何临床表现相关，治疗后的SLE 患者也可存在抗Sm 抗体阳性。抗Sm抗体的检测对早期、不典型的SLE或治疗后的回顾性诊断具有很大帮助。
（3） 抗SSA/Ro抗体 其抗原SSA／Ro是含有Y-YRNA的蛋白质，主要存在于胞浆内。以鼠肝为底物的ANA检测中，抗SSA抗体常呈阴性反应，而以Hep-2细胞为底物，则ANA常为阳性。
（4）抗SSB/La抗体 SSB／La是RNA多聚酶转录中的小RNA磷酸蛋白质。抗SSA抗体和抗SSB抗体是SS患者最常见的自身抗体，在原发性干燥综合征（SS）中其阳性检出率分别是60％和40％，而抗SSB抗体的特异性高于抗SSA抗体。该两个抗体的同时检测可提高对SS的诊断率。在其他风湿性疾病中，该两种抗体亦可存在，常与血管炎、淋巴结肿大、白细胞减少、光过敏、皮损、紫癜等症状相关。
（5）抗Scl-70抗体 Scl-70是分子量为100kD的DNA拓扑异构酶I（topoisomerase I）的降解产物，该抗原在DNA复制和转录过程中，可松解DNA超螺旋，使DNA上的基因得以表达。此抗体对系统性硬化症（SSc）的诊断高度特异，此抗体阳性的患者病程长于阴性者，发生肺间质病变的危险性大。
（6）抗Jo-1 抗体 Jo-1 抗原是分子量为50-55kD的组氨酰-tRNA合成酶，位于胞质，其功能是催化组氨酸与tRNA结合。抗Jo-1 抗体是DM/PM的标记性抗体，在合并肺间质变的PM/DM病人中，抗Jo-1 抗体高达60％。此抗体阳性的患者，常有发热、对称性关节炎、“技工手”、雷诺现象、肌炎合并肺间质病变，被称为抗Jo-1 抗体综合征。
（7）抗rRNP抗体 rRNP(ribosome RNP)是主要在胞浆中的一种磷酸蛋白，免疫印迹法测得抗rRNP抗体主要有38kD, 16kD，15kD 三条蛋白多肽。抗rRNP抗体常与SLE活动期中及有内脏损害（如脑病）的患者中存在。
15. 抗着丝点抗体(ACA)
抗着丝点抗体 (anti-centromere antibody, ACA)是针对细胞分裂前期核内出现的染色体着丝点结构相关蛋白的自身抗体，其靶抗原为着丝粒中的三种不同的DNA蛋白质，即着丝点A、B、C，分子量分别为17kD、 80kD、140kD，其中主要抗原为着丝点B。ACA多见于系统性硬化中的CREST综合征(临床表现为软组织钙化、雷诺氏现象、食道功能低下、指端硬化、毛细血管扩张)，ACA阳性率达90％，其他结缔组织病很少见。该抗体可较早出现于患者血清中，仅有雷诺氏现象者也可阳性。临床研究发明，抗着丝点抗体与血管炎、肺受累有关，不随病情变化而波动，而且多提示预后相对较好。
16. 抗磷脂抗体(APL)
抗磷脂抗体(antiphospholipid antibodies,APL) APL是一组针对各种带负电荷磷脂的自身抗体，包括抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody, ACL)、狼疮抗凝物(lupus anticoagulant, LAC)、抗磷脂酰丝氨酸、抗磷脂酰胺醇、抗磷脂酰甘油、抗磷脂酸和抗β2–糖蛋白Ⅰ抗体(anti-β2—GP Ⅰ antibody)等。这些抗体常见于抗磷脂综合征(APS)、SLE、神经系统疾病、急慢性白血病、肾脏和消化系统疾病中，与这些疾病的凝血系统改变、血栓形成、血小板减少等密切相关，并于疾病的发生机制有关联。目前临床上常规检测的抗磷脂抗体仅为抗心磷脂抗体和狼疮抗凝物。
（1）抗心磷脂抗体(ACL) ACL是一组特性不同的非均一性抗体，目前多采用最敏感的ELISA方法检测，由于它较其他APL的阳性率高，易检测、重复性好，故它是APL中研究最多的一种抗体。APL主要有IgG、IgM、IgA三种类型，其中高水平的IgG型对原发性抗磷脂综合征(APS)的诊断最为特异；ACL在SLE中的阳性率为20%～50%，主要是IgG和IgM型；血栓形成、习惯性流产和血小板减少主要与IgG型的抗体相关；干燥综合征中IgA型的抗体出现率高，IgA型抗体也与习惯性流产和重症格林-巴利综合征相关。ACL的水平越高，越易发生并发症。另外，在其他风湿性疾病、药物性狼疮、肿瘤和感染性疾病中都可出现ACL，但很少发生上述并发症，存在这种差异的原因可能与抗体的类型、水平、亲和力、结合的特异性及环境遗传因素等有一定的关系。
(2)狼疮抗凝物(LAC) LAC是一种能延长凝血时间的抗体，它同凝血酶原复合物中的磷脂成分结合而抑制血凝。LAC可以是IgG型或IgM型或两者共存。LAC能与多种凝血因子反应，它不仅与异常出血有关，而且与血栓的形成有关。检测LAC常用的方法有：白陶土凝固时间、Russell viper venom时间、活化部分凝血活酶时间(aPTT)、蛇毒时间等，当所测得的时间延长，而又不能为正常血浆所纠正时，常提示有LAC存在。LAC在SLE中的阳性率最高，但它不仅出现在SLE中，也可出现在其他疾病，如特发性血小板减少性紫癜、真性红细胞增多症、链球菌感染、恶性肿瘤、肝炎及服用吩噻嗪类药物的患者。
17. 抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)
抗中性粒细胞胞浆抗体 (antineutropil cytoplasmic antibodies, ANCA)是针对中性粒细胞和单核细胞胞浆蛋白的自身抗体谱，其靶抗原包括人类中性蛋白酶3（PR-3）、髓过氧化物酶（MPO）等近10种成分，根据间接免疫荧光法检测时在显微镜下可观察到的荧光图谱可分为：①胞浆型(c-ANCA)：主要抗原成分为存在于中性粒细胞嗜苯胺蓝颗粒中的29kD丝氨酸蛋白酶(即蛋白酶3, PR-3)；②核周型(p-ANCA)：抗原成分主要为髓过氧化物酶(MPO)；③非典型型(aANCA):兼有以上两型特点，其主要靶抗原目前尚不清楚，也较难与p-ANCA区分)。c-ANCA与PR3-ANCA均与韦格纳肉芽肿病的关系密切, 其中c-ANCA的诊断特异度达90%，如加上PR3-ANCA，则特异度可达95%, 其滴度与病情活动一致，常被作为判断药物疗效和病情复发的指标。p-ANCA主要与显微镜下多血管炎、坏死性新月体肾小球肾炎和过敏性肉芽肿相关，其滴度与病情活动相关，可用于判断预后、病情复发和判断药物疗效。与c-ANCA相比，p-ANCA阳性的患者出现血管炎病变程度较重，并常有多系统受累。
但下列疾病可出现假阳性: ①感染性疾病：艾滋病、心内膜炎、胰纤维性囊肿(继发感染)及病毒性肠炎等；②肿瘤：心房粘液瘤、结肠癌、支气管癌和非霍奇金淋巴瘤等.③其他：嗜酸性粒细胞增高性纤维肌痛综合征和Sweet综合征等。
18. 人类白细胞抗原(HLA)
人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）复合体，是人类的主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex, MHC），位于6号染色体上（6p21.31），第8次国际组织相容性会议确定HLA 有92个，分属于A、B、C、D和DR五个位点，分别称为HLA-A，HLA-B，HLA-C，HLA-D和HLA-DR。
HLA-B27属人白细胞抗原Ⅰ类分子, 约90 %~95 %以上的强直性脊柱炎（AS）患者HLA-B27阳性。
HLA-DR抗原主要存在于B淋巴细胞、单核细胞及内皮细胞的细胞膜上。HLA-DR4/DR1与类风湿关节炎的发生及演变有关。有48%~90%的RA患者携带DR4或DR1基因单倍型。病情轻、关节外病变少的RA患者一般为表达单倍型者，而DR4/DR1纯合子，尤其是DRB10401纯合子患者多并发关节外病变，病情进展快。
19．其它检查
一些少见风湿病，偶有进行下面项目的检查：
(1) 基质金属蛋白酶(matrix metalloproteiase,MMP)：MMP 是降解细胞外基质的重要酶类,属高度保守的依赖锌离子的内切蛋白水解酶家族。它参与了许多骨科疾病的进程, 其中MMP-19 又称为类风湿关节炎滑膜炎症因子-1 ,它主要表达于RA患者及正常人的滑膜组织中。其中基质金属蛋白酶抑制因子可能是一种RA 早期活动程度的临床标记物。
(2) 血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)：VEGF 是一种与肝素结合的糖蛋白，相对分子质量为(34～42)×103 的同源二聚体，具有特异性血管生成，有丝分裂原和增强血管通透性的作用，对RA的发病具有重要意义。近年来发现在RA 病变的关节部位VEGF 值明显增高，VEGF可以作为反映RA病情程度的一项指标。
(3) 血清淀粉样蛋白A (serum amyloid aprotein ,SAA):在RA 病情活跃程度的分析中，SAA明显比CRP更敏感，在所有RA 患者的组织中都可检测出A2SAA mRNA。在培养的RA滑膜细胞中和RA 患者的分泌滑液的组织中均发现有A-SAA mRNA，A-SAA mRNA 表达在活动期RA患者的滑膜细胞中,而在非活动期RA 患者的滑膜细胞中则不表达。
(4) 抗血清抗病毒瓜氨酸肽抗体(antiviralcit rullinated peptide anti-VCP) : 抗VCP 抗体有助于RA 与其他慢性关节炎或结缔组织病之间的鉴别诊断，且可信度与抗CCP 水平呈正相关，提示它可作为一种新的指标用于检测RA。 |
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