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实验万事屋作品 我叫郭芙，是莫愁师姐的师妹，总之这件事情还挺棘手的。事情是这样的，我投了一篇文章基因敲减方面的文章，做了NC 和siRNA的CCK8增殖实验，评审回来说增加一个add-back rescue实验。呃……天啊，啥是add-back rescue实验啊？是不是要过表达这个基因啊？师姐救命！ 实验万事屋作品 是夜…… 实验万事屋作品 莫愁：好感人啊，楚楚救了步惊云…… 实验万事屋作品
小郭：师姐，现在要靠你救我的命了，你怎么还看这种十几二十年前的电影啊，会暴露年龄的好么。说正经的，师姐Rescue Experiment（回复实验）怎么做啊！review要我补这个实验！ 实验万事屋作品 莫愁：啊？补回复实验啊？呃……给你举个例子吧…… 实验万事屋作品 步惊云找雄霸搏命，最后被雄霸打断手臂掉进河里。然后被楚楚救了起来，楚楚她爹又把自己的麒麟臂移植给了步惊云。看到这里真的是让人唏嘘不已啊。好了，说正经的，这其实就是一个Rescue Experiment。 实验万事屋作品 实验万事屋作品 所谓的Rescue Experiment，就是在敲减实验验证了表型（被打断手臂）之后，再通过过表达（移植上麒麟臂），回补表型（事实证明移植完麒麟臂之后，步惊云的表型确实回复了）的一种实验。 实验万事屋作品 实验万事屋作品 但大家又不禁要问，老娘做的是慢病毒感染的稳转株，再进行过表达的话，会不会也被转进去的siRNA给敲减掉呢？这个问题就好像是在说，步惊云要是只移植上一条手臂那么单纯，那到时候还不是被雄霸见一次打一次？ 实验万事屋作品 实验万事屋作品 好了，其实真正的Rescue Experiment，是要对你过表达的这个目的基因的序列进行突变的。也就是利用所谓的Off-target effects（脱靶效应）来处理过表达的序列。siRNA仅仅是目的基因的十几个碱基起到作用，也就是可以互补结合上去，所以只要Rescue Experiment中过表达的这个目的基因，在靶点位置，做一定的突变，就可以使siRNA对其脱靶了。就好像步惊云移植上去的不是他自己的那条断臂，而是楚楚老爹带了纹身的麒麟臂一样。 实验万事屋作品 实验万事屋作品 问题又来了，既然过表达的基因要突变，那表达出来的蛋白还是原来的基因的么？这个问题很简单，因为基因的密码子是有简并性的，也就是说三联体密码的第二和第三个碱基是可以调换的，同样表达相同的蛋白。这样就不会影响到原有的敲减实验了。好了，明白了么！ 实验万事屋作品 实验万事屋作品 小郭：师姐，我懂了！楚楚的老爹好可怜啊……赔了女儿又断臂…… 实验万事屋作品 莫愁：……这不是重点…… 实验万事屋作品 …华丽丽的分割线… 实验万事屋作品 李莫愁博士：纹了身就不认识你了么，确实对于siRNA来说，纹了身的mRNA就基本上不认识他了。 实验万事屋作品 实验万事屋作品 |
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