BSP克隆测序法（Bisulfite Sequencing PCR，BSP）

BSP实验原理：

    BSP克隆测序法，是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后再CpG岛两端设计引物进行PCR，将目的产物纯化后进行TA克隆，每个克隆挑取阳性克隆测序，最后将测得的序列与原始序列比对，统计甲基化位点及数量，并分析甲基化程度。

 

 

 BSP实验流程：

 

优点：

    1、克服了MSP只能作定性研究，可做定量研究；

    2、敏感性高，待测DNA中5-甲基胞嘧啶分布极不均衡也可检测；

    3、引物设计相对简单。

 

缺点：

    1、价格高。

 

送样要求：
    1、组织样本：-20℃或-80℃低温冰箱中保存，液氮或者干冰运输；市内或短途运输可冰袋运输。若提供的材料为新鲜组织、血液细胞等生物材料，请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量。
    2、DNA样本：体积≥20ul，浓度≥100ng/ul，DNA总量≥2ug，20℃保存，低温冰袋运输。
    3、血液样本：要求保存于抗凝管中或冻存管中，体积大于2ml，请用干冰运送，保证DNA不降解。
    4、样品为石蜡包埋组织切片的，要求提供10张组织切片光片（面积>10mm×10mm,厚度约5-10um）。