|
加入组培圈 · 一起学组培  南天竹（Nandinadomestica）为小檗科南天竹属一种，常绿灌木，是观叶、观果的优良地被和色块植物。 本文以红叶南天竹茎尖为试材，筛选出了有效的抑制内生菌的抑菌剂和适宜的组织培养基配方，建立了植株再生体系，为南天竹红叶无性系快繁奠定了基础。 1 材料与方法 1.1 外植体材料及培养条件 1.1.1 外植体选择 从南天竹实生苗中选取健康、冬季嫩枝和叶色鲜红的植株作为实验材料。 1.1.2 外植体预处理及消毒 在采芽前1个月左右每隔7-10天整株喷洒800倍多菌灵，然后采集新枝，剪除上面的羽状复叶，用自来水冲洗干净，用洗洁精溶液浸泡5-10分钟，再用自来水冲洗30分钟。 将洗干净的外植体置于超净工作台上，用75%的酒精浸泡20-30秒，倒掉酒精后加入0.1%升汞溶液，盖上瓶盖，其间不断摇动溶液，消毒8-10分钟后倒掉升汞溶液，然后用无菌水冲洗4-5次，再用无菌刀剥取5mm左右大小的茎尖。 1.1.3 培养条件 培养温度(25±2)℃，光照时间为12小时/天，光强1500-2000lx。 2 结果与分析 2.1 初代诱导培养 将处理好的外植体迅速接入诱导培养基（配方见文末，下同）中，25天左右茎尖开始萌动并生长，50天左右有愈伤组织形成，60天左右愈伤组织中陆续有不定芽产生。 2.2 继代增殖培养 诱导培养60天后，将小于0.5cm的不定芽直接转接至增殖培养基，大于0.5厘米新芽(梢)切割成0.5-1.0厘米左右的茎段转接，培养60天。  2.3 内生菌抑制措施 植物体中的内生细菌潜伏得较深，表面消毒无法将其消除。这种污染在外植体初期培养中(前几代的继代培养)不易被肉眼察觉，随着继代次数的增加，植株体内细菌逐渐累积，在培养基上显现出来。 试验观察到，南天竹在组培过程中内生菌大体有两种表现形式： 其一，为接种20天左右培养基表面出现乳白色分布不均的小白点，然后逐渐干缩，与常见的细菌污染(脓状)或真菌污染(菌丝)状表现不同，并且不影响植株生长，仍能分割继代培养； 其二，为培养基内部接种茎段基部出现呈白色丝状或片状污染，随培养时间延长蔓延至培养基表面，基本不影响植株生长，但不能用于分割继代培养。 为了抑制内生菌，本试验采用以下两个措施： 2.3.1 茎尖大小 选择新梢部位的茎尖作为外植体，因为新梢生长较快，内生菌积累数量相对较少，同时茎尖大小为0.2-0.5厘米，茎尖过小容易引起褐化；茎尖越大越容易感染内生菌。 2.3.2 添加50%多菌灵可湿性粉剂 添加1.5g/L的50%多菌灵可湿性粉剂的培养基上，对南天竹的内生菌抑制有显著作用。 2.4 经壮苗培养后生根培养 将增殖阶段3cm以上的嫩茎切下接入壮苗培养基中培养30天后转接到生根培养基中，经壮苗培养后，生根率及生根数比直接生根法都有所提高。经低浓度BA刺激后，嫩茎木质化程度有所提高，叶片舒张，叶色深绿。 3 讨论 南天竹为常绿灌木，在外植体接种时往往因为消毒不彻底而将内生菌带入培养体系，所以内生菌的抑制是南天竹组培的关键。 本试验发现，较高的培养基pH值及一定浓度的细胞分裂素BA，有利于南天竹的生根。 附配方 诱导培养基：MS + 6-BA 1.0mg/L + IBA 0.1mg/L 增殖培养基：MS + 6-BA 1.5mg/L + IBA 0.1mg/L 壮苗培养基：MS + 6-BA 0.25mg/L 生根培养基：1/2MS + 0.25 mg/L IBA + 0.1mg/L NAA + 0.2g/L AC 以上配方均含3%蔗糖和0.7%琼脂，pH5.8-6.0（生根培养基的pH值为6.5）。 |
|
|
