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近年来，「液态活检」概念异军突起，不仅可以辅助诊断某些类型实体肿瘤，而且能够监测复发，评估疗效及肺癌分子表达，更是无创肿瘤筛查方法。 其来源包括循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cells, CTC），临床研究显示，CTC 在肿瘤领域可以发挥类似肿瘤标志物的作用，用于肿瘤的辅助诊断、治疗疗效的评估、术后随访中监测复发。 丁香园荣幸地邀请到中国抗癌协会肿瘤标记委员会青年副主任委员、上海交通大学附属胸科医院检验科娄加陶教授，与我们分享有关靶向 PCR CTC 检测技术以及在肺癌领域应用价值的前沿资讯。 娄加陶教授：由于 CTC 在其外周血中的数量很少，每 105～107 个有核细胞中才有一个 CTC，因此对 CTC 的检测技术要求更为准确、敏感。CTC 的检测方法主要分为两部分：CTC 富集技术和 CTC 检测技术。 CTC 的富集方法主要基于 CTC 的物理学特征（大小、密度、电极、可变行性）和生物学特性（细胞表面蛋白、生存能力和侵袭性）进行富集。包括：密度梯度离心法、基于细胞大小的膜过滤法、免疫磁珠分离法、微流体芯片分离技术。 CTC 的检测也是通过对 CTC 特异表达的肿瘤或上皮蛋白或 mRNA 来进行的。主要方法包括靶向 PCR 法、免疫荧光法，流式细胞术，逆转录-聚合酶链反应和酶联免疫斑点法。 娄加陶教授：CTC 的检测方法很多，而理想的 CTC 检测方法应该是：高敏感度，易于临床应用和结果可重复。 该方法是目前最新的 CTC 检测技术，而且为国内原创。其原理是肺癌等 CTC 表面会过量表达某些特异性受体，如叶酸受体（FR），靶向 PCR 利用的配体类似物交联核苷酸片段作为检测探针，通过细胞表面特异性受体与其配体类似物的结合来实现探针与 CTC 细胞的结合，从而将 CTC 数目转化为探针的数目，并且通过对探针的 PCR 定量检测来计算 CTC 的数目。 传统的细胞免疫荧光分析往往对纯度要求很高，负向富集纯度往往满足不了。由于具有受体配体结合（1 个 CTC 表面存在上万个特异性受体）及 PCR 的两次信号放大，从而可使 1 个 CTC 信号放大约 1012 倍。因此，配体介导的靶向 PCR 法，具有超高的灵敏度的特点，从而使早期肺癌中探测 CTC 成为了可能。另外，该方法临床仅需 3 mL 全血，临床应用便捷度较高。 娄加陶教授：该研究是目前肺癌领域样本量最大的 CTC 临床研究，全国共纳入 1200 多例，其研究结果有以下几个特点： 第一， 通过肺癌患者、肺部良性疾病、正常人的对比，确定了肺癌 CTC 检测做为辅助诊断 cut off 值。这也是目前唯一能明确肺部病灶良恶性鉴别 cut off 值的肺癌 CTC 检测技术。 第二， 从临床大样本上，验证了靶向 PCR CTC 检测技术具有超高敏感度。总体而言，肺癌检测敏感度为 80%，特异性也达到了 88%。值得一提的是特别是 I 期（早期）肺癌，敏感度可达 67.2%。我们同时把小于 1 cm 的肺部恶性小结节的数据进行了分析，也达到了 60% 左右的敏感度。 在肺部小结节和团块影的辅助诊断方面，该方法显著优于一般肿瘤标志物，敏感度可提高 10 倍左右。我们分析过，如果联合胸部 CT，靶向 PCR CTC 检测技术可显著降低胸部 CT 筛查的假阳性率，同时减少肺癌漏诊。 |
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